[求救] 放大cDNA的一些問題 | 合法醫療器材資訊網
就是我可以先把加藥處理完的細胞都抽RNA轉成cDNA那以後就可以不用再養細胞而...MacBook:濃度那邊你應該搞錯意思了吧應該是轉完的cDNA去做序列稀 ...
作者wayne841503 (JPG)
看板Biotech
標題[求救] 放大cDNA的一些問題
時間Sat Jan 30 00:17:16 2010
因為最近要幫老師做專題遇到了一些問題... 有蠻多不懂的地方想請教一下板友 就是該實驗最後要用real time PCR 去定量看gene的表現量 而事前要將抽RNA後轉成cDNA 再拿cDNA去做real time 我們實驗室是用Trizol去抽... 照理說抽出來的應該是細胞內所有的RNA (包含mRNA rRNA) 而後用OligodT去轉cDNA ←應該是所有細胞中的mRNA都會被轉成cDNA對吧? 之後就將cDNA拿去用待測gene的primer去夾用PCR放大 因為目前還不知道要挑哪些gene出來測 所以我們BOSS是說 先把RNA抽出送去做PCR array再從中挑幾個用real time去檢測是否符合 我們BOSS說每個濃度只要做一管轉成cDNA就好 之後的real time都可以用那管去做 我的疑問是...今天待測基因約有5個 而且要做3重複 如果都從那管有整個細胞的mRNA轉成的cDNA取出 應該會不夠 那如果要將該管cDNA用PCR放大 那primer要怎麼辦? 因為你不知道那管cDNA的組成 那你要怎麼去放大全部的片段? 還有一個問題...就是我可以先把加藥處理完的細胞都抽RNA轉成cDNA 那以後就可以不用再養細胞 而只要從那管cDNA去做就好 這樣嗎 ?? 這是第一次做PCR所以有很都不懂的地方...請大家幫忙看一下是否觀念有錯 謝謝 -- ◤ ▂◎▅◎▂ ◆◆ ▲▲ ◥ ◢◤◥◥ ◣ ◆◆ ◢◥◤◥◣ ◣東方project系列 ▋> <◢▋ ◆◆ ▋◣ ◢ ▍  ̄ ̄ ̄ ̄ ̄ ̄ ̄ ▌▄▄▄◤▎ ◆◆ ◆◆ ◥◣▄▄▄◢◤ 持續推廣ing ▼| |▼ ◆◆ ◥  ̄██>◥◤ ◣ ▲▆▲ 少女受虐中... ◆◆ ◤ ▼◥ ψ涼宮 域 gbwind ◢ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 114.39.3.19 ※ 編輯: wayne841503 來自: 114.39.3.19 (...qPCR常見問題彙整 | 合法醫療器材資訊網
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