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原位雜交（ISH）是一種功能強大的技術，可用於檢測組織或細胞中染色體上的DNA或RAN序列的存在、缺失、定位、完整性和數量。ISH基於互補核酸單鏈的鹼基 ...

螢光原位雜合（Fluorescence in situ Hybridization）

原位雜交（ISH）是一種功能強大的技術，可用於檢測組織或細胞中染色體上的DNA或RAN序列的存在、缺失、定位、完整性和數量。 ISH基於互補核酸單鏈的鹼基配對（雜交）檢測特異序列。在這種技術中，一條鍊是標記的序列片段（探針），僅與基因組中與之高度或者完全互補的序列結合，另一條鏈存在於待分析的樣本材料中。因此，原位雜交始於製備分析用的樣本和探針。將樣本中的典型雙鏈DNA變性成單鏈，並需要對探針進行標記以便於檢測。

19世紀60年代開發了ISH的基本步驟，採用放射性同位素進行探針檢測。 19世紀80年代初，開發了採用熒光染料進行探針可視化的方法。因為這些標記更安全、更穩定、更易於處理，今天，大多數的原位雜交採用FISH方法。 FISH的另一個重要優點是：通過採用幾種不同的熒光染料，可同時檢測單個樣本中的不同靶結構。

FISH已成為細胞遺傳學的一種重要技術。探針片段有多種來源：通過重組方法，或者通過PCR。今天，最常用的探針類型是經準確構建的細菌人工染色體（BAC）。設計或選擇合適的FISH探針往往需要在靈敏度和特異性之間取得平衡，即，一個探針必須足夠大，以確保特異性結合，以及攜帶足夠數量的標記進行檢測。另一方面，隨著探針長度的增加，探針與其他靶序列雜交的可能性也增加。此外，探針如果太長，可能產生較大的信號或彌散性信號。

可直接將熒光分子與探針連接，或者用抗原或化學基團標記探針，抗原或化學基團隨後與熒光基團結合，完成探針標記。根據使用的方法，標記過程可能從幾個小時到幾天不等。稱為“原位”是為了強調如下事實：不是檢測試管中分離的靶核酸分子，而且可直接檢測新鮮或固定細胞或組織中的靶核酸分子。

採用FISH技術，可直觀地觀察中期（凝集）染色體上的染色體重排或小到幾兆鹼基對（百萬個鹼...