螢光原位雜合技術 | 合法醫療器材資訊網
2013年8月31日—螢光原位雜合技術(FISH)是一種細胞遺傳學技術,可以用來檢測基因體上面特定核苷酸序列的存在,亦可藉由檢測信使RNA(mRNA)的表現量來 ...
螢光原位雜合技術 (Fluorescence in situ hybridization, FISH) 國立臺灣師範大學生命科學系研究助理林如愔
螢光原位雜合技術(FISH)是一種細胞遺傳學技術,可以用來檢測基因體上面特定核苷酸序列的存在,亦可藉由檢測信使RNA(mRNA)的表現量來觀測基因的表現。其基本原理如圖一所示:在小片段的DNA探針上以缺口轉化法(nick translation)標定Dig-dUTP或Biotin-dUTP,接著取一片經由福馬林(formalin)固定好的組織切片,將帶有標定的單股DNA探針與之進行雜合,完成之後使用螢光標定的Anti-Dig/Biotin抗體(antibodies linked with a fluorophor)進行檢測。此抗體會專一性結合上樣本中已經被Dig/Biotin標記引子雜合的核酸,螢光標定的抗體可在螢光顯微鏡下被觀測到螢光。
相比於傳統用於檢測DNA/RNA存在或表現量的PCR,RT-PCR或real-time PCR等技術,FISH存在以下特色:
1.其檢測方式為直接將探針送入固定好的細胞/組織中進行檢測,比起將核酸取出的PCR檢測方式,FISH除了偵測表現量的變化之外,更能夠對目標核酸序列在細胞內或是組織內的分佈有視覺性的直接觀察。
2.PCR產物需要用膠體電泳的方式觀察。引子對間可能的相互干擾或是相似的產物大小會嚴重影響結果的觀察,而使得很難藉由在同一個反應中放入不同的引子對來同時檢測不同的產物。然而FISH可以利用不同的螢光蛋白,簡單的以顏色來分辨不同的目標序列。
3.對比一般PCR需要一定數量的細胞來萃取DNA/RNA進行反應,FISH可以在單個細胞的數量級進行獨立的檢測,如圖三。這在諸如病毒感染、細胞病變或突變等領域的檢測及治療的評估扮演了重要的角色。
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