Emulsion PCR | 合法醫療器材資訊網

2014年3月20日—在圖二、A之SDS-PAGE圖中可發現，傳統PCR在大約14cycles開始出現非專一性副產物，並且隨著cycle數的增加時，副產物越來越多，專一性 ...

實驗上，我們時常使用 Polymerase Chain Reaction (PCR) 這項技術增幅目標核酸片段，這在建構NGS gDNA 或cDNA library時亦是其中重要的一環，然而實際上，進行 PCR 會因為兩種現象而機率性地產生非預期的結果：第一、在增幅過程中，片段小的 template 會傾向較容易地被放大；第二、經 PCR產生的產物有部分序列相似時，它們會在 annealing 的步驟中發生部份的雜合配對，而在extension 的步驟被 polymerase 延長，進而產生 chimeric副產物。此外，PCR 的過程中有時會伴隨 primer extension 不完整的產物產生，這樣的產物會在前述的部分配對中，在下一個 PCR cycle 繼續的被延長，但產生大小不一的 chimeric副產物。眾多的 PCR protocol 考量到上述現象，會適當地調整步驟，例如：提高 DNA模板的濃度或是降低 PCR 的 cycle 數，然而，當面對模板 DNA 極微量的情況時，就很難避免 PCR cycle 數的增加，而提高 chimera 出現的風險 (圖一、左)。

針對上述傳統 PCR 的弱點，新式的 PCR 方式被開發出現，利用油水不互溶的特性，製作出許多微小的水滴散布在油類溶液環境中，各種序列不同的模板 DNA 分子被隔離分開至各水滴中，每個水滴均為水性緩衝溶液並包含 PCR 過程所需的材料：DNA polymerase、primer、dNTPs，在適當的比例調配下，每個微小的水滴可少至僅含一條模板DNA 分子，使得每個水滴中的 PCR 反應互相不影響，只會忠實的放大同一條模板分子，所有的 PCR 產物平均地生合成且不會再因部分配對的雜合而被錯誤放大，PCR 反應材料不需競爭、也不因酵素催化的喜好性而出現偏向，徹底解決前述傳統 PCR 的問題 (圖一、右)。

為了進一步證實 emulsion PCR 優點，將 2 組同樣需要進行 PCR反應的 random DNA ...