PCR循环参数—成功的六大关键因素 | 合法醫療器材資訊網

PCR循环数的确定.为扩增目标DNA，需重复（或“循环”）PCR的变性、退火和延伸步骤多次。循环 ...

DNAインプットの適切な量およびPCR構成要素を決定[1]したら、効率的な増幅になるように、PCRサイクリングおよびパラメーターを設定しなければなりません。DNAポリメラーゼの特性、PCR緩衝液の種類、およびテンプレートDNAの複雑性は、これら反応条件のセットアップにすべて影響を与えます。本セクションでは、PCRプロセスの重要なステップの図解とともに、PCRサイクリングパラメーターの一般的考察について論じます（図1）。

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図1. テンプレートDNAから標的配列を増幅するPCRの主要ステップ─変性、アニーリング、伸張─の図解。  

初回の変性ステップは、PCRの初めに実行され、2本鎖テンプレートDNAを1本鎖に分離します。これにより、プライマーが標的領域と結合して伸長を開始できるようになります。インプットしたDNAが完全に変性すれば、初回増幅サイクルから標的配列が効率的に増幅できるようになります。さらに、本ステップでの高い温度（94～98°C）は、試料中に存在する可能性のあるプロテアーゼまたはヌクレアーゼを失活させやすくする一方、熱に安定なDNAポリメラーゼに与える影響はごくわず...