利用硫酸銨沉澱蛋白質 | 合法醫療器材資訊網

2008年7月8日—今天作的實驗是利用硫酸銨沉澱蛋白質，從之前作過的經驗知道，這一個步驟是有名的煩，要慢慢用敲的把硫酸銨緩緩的加入蛋白質溶液中。相關的原理 ...

相關的原理可以在莊榮輝學習網站[1]中找到， 與鹽溶剛好相反，在蛋白質溶液中加入硫酸銨，會使得蛋白質的溶解度下降，因而沈澱出來。因為硫酸銨所解離的離子容很大，所帶的電子數也多 (NH4+, SO42-)，因此當其溶入水中時，會吸引大量水分子與這些離子水合。

在計算所添加的硫酸銨的重量方面， 找到了一個不錯的網站， 硫酸銨計算機[2] 裡面可以靠著輸入實驗溫度、溶液體積、 想要到達的百分濃度以及初始的百分濃度這四個數值， 就可以得到需要添加的硫酸銨克數， 以及在加入固體硫酸銨後所增加的體積， 算是一個很不錯的網站。

此外另一個比較值得提的， 是我有用兩種方式加入硫酸銨， 第一種是固體的硫酸銨模碎加入， 另一種是將硫酸銨溶成飽和溶液再加入， 各有各的優缺點，比較如下：

1. 造成蛋白質變質的程度： 固體的硫酸銨>硫酸銨飽和溶液 利用硫酸銨飽和溶液真的超棒， 滴入的速度可以很快而不造成變質(沒試過用倒入的)。 不像固體的硫酸銨只能磨碎慢慢加入， 速度一快蛋白質就壞了(溶液有緻密的白色氣泡產生)。

2. 操作的容易度： 硫酸銨飽和溶液>>固體的硫酸銨 固體硫酸銨最大的缺點就是操作不容易， 要一直敲敲敲又不能太快， 所以當你要溶解的蛋白質很多時， 這是很累的步驟。 然而硫酸銨飽和溶液比較麻煩只有在配製部分， 要先加熱讓它...