[求救] 如何提升RNA提取質量 | 合法醫療器材資訊網
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大家好，目前提取RNA遇到一個瓶頸，想請版友指點迷津：收集RNA的步驟是...每次收集下來的RNA我都固定溶於10ulDEPCwater，所有樣品固定使用1ml...謝謝感激不盡--※發信站:批踢踢實業坊(ptt.cc),來自:58.114.139.73 ...
作者forever430 (Right of Left)
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標題[求救] 如何提升RNA提取質量
時間Mon Apr 22 21:55:13 2019
大家好，目前提取RNA遇到一個瓶頸，想請版友指點迷津： 收集RNA的步驟是使用Trizol and Chloroform 去提取，我的樣品條件會同時重複8組，每 一組樣品下25萬顆細胞，之前都能順利收到足夠質量的RNA進行後續轉cDNA步驟，但最近 出現相同手法但是總質量都過低情況。 每次收集下來的RNA我都固定溶於10ul DEPC water，所有樣品固定使用1ml Trizol進行提 取。 第一次失敗樣品總共重複8組，我想說過程可能不小心出錯，第二次保險起見，我樣品準 備了10組（提高細胞數量），並以相同提取方法再試一次，分析濃度後如下圖： https://i.imgur.com/RGlqkx2.jpg[1] 第三次我一樣準備10組樣品，此次改變一些手法，樣品使用冰的PBS進行清洗後（看能否 避免降解）再加入Trizol，加入Trizol後再使用刮棒進行刮除，接著把Trizol吸取到15ml 離心管，放置到冰浴上(希望能避免降解），接著再清洗第二組樣品，然後把離心管內的T rizol再抽出來加入第二組樣品，重複步驟持續下去... 分析的濃度如下圖： https://i.imgur.com/ki1w6uC.jpg[2] 由於RNA轉成cDNA需要5ug，已連續3次出現整體RNA質量不足的情況，目前想不出哪些可能 原因造成此情況，想請版友不吝指教或者分享相關經驗。 謝謝 感激不盡 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 58.114.139.73 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1555941315.A.9F6.html[3]→ jjlee: 純度很高，傳統法的產率不太受降解影響。 提高細胞量增加 04/22 22:32
→ jjlee: 到10...
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