硫酸銨沉澱法的原理及步驟？ | 合法醫療器材資訊網

1 # 深海中的一條小魚

抗體的純化 ( 硫酸銨沉澱法）

一， 基本原理

硫酸銨沉澱法可用於從大量粗製劑中濃縮和部分純化蛋白質。用此方法可以將主要的免疫球從樣品中分離，是免疫球蛋白分離的常用方法。高濃度的鹽離子在蛋白質溶液中可與蛋白質競爭水分子，從而破壞蛋白質表面的水化膜，降低其溶解度，使之從溶液中沉澱出來。各種蛋白質的溶解度不同，因而可利用不同濃度的鹽溶液來沉澱不同的蛋白質。這種方法稱之為鹽析。鹽濃度通常用飽和度來表示。硫酸銨因其溶解度大，溫度係數小和不易使蛋白質變性而應用最廣。

二， 試劑及儀器

1 . 組織培養上清液、血清樣品或腹水等

2. 硫酸銨（ NH 4 ） SO 4

3. 飽和硫酸銨溶液（ SAS ）

4. 蒸餾水

5. PBS( 含 0.2g /L 疊氮鈉 )

6. 透析袋

7. 超速離心機

8. pH 計

9. 磁力攪拌器

三， 操作步驟

以腹水或組織培養上清液為例來介紹抗體的硫酸銨沉澱。各種不同的免疫球蛋白鹽析所需硫酸 銨的飽和度也不完全相同。通常用來分離抗體的硫酸銨飽和度為 33% — 50% 。

（一）配製飽和硫酸銨溶液（ SAS ）

1.將 767g （ NH 4 ） 2 SO 4 邊攪拌邊慢慢加到 1 升 蒸餾水中。用氨水或硫酸調到硫酸pH7.0 。此即飽和度為 100% 的硫酸銨溶液（ 4.1 mo...