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四、免疫組化染色步驟IHCPotocol1.烤片65℃,60分鐘或37℃,overnight2.脫蠟,XyleneX2,各10分鐘。(或XyleneX3,各8分鐘)3.覆水,99.9(100)%x2、95 ...
一、為什麼要做免疫組織化學染色?
研究從細胞實驗In vivo到動物實驗In vitro。藥物毒殺、細胞凋亡、癌症發生機制、 細胞傳遞pathway、Knockdown、MicroRNA…等等,為了驗證實驗正確。
免疫組織染色已經是研究趨勢
二、組織處理-石蠟包埋之步驟
三、石蠟切片
以石蠟製作的切片,可以製成極薄的切片,一般的切片厚度要求在3-5微米,而石蠟切片不但可以達到這個要求,甚至可以切得更薄到2微米以至1微米,這一點是冰凍切片難以獲得的結果。 另外,石蠟切片還便於製作大批的或是連續的切片,而且以石蠟包埋的組織塊便於長期保存,所以石蠟切片是目前各種切片製作方法中最普通常用的一種方法。
四、免疫組化染色步驟IHC Potocol
1. 烤片 65℃,60 分鐘或 37℃,overnight
2. 脫蠟, Xylene X 2, 各 10 分鐘。(或 Xylene X3,各 8分鐘)
3. 覆水, 99.9(100) % x 2、95 % X1、85% X1、75% X1 各四分鐘。
4. De-peroxidase reagent,室溫 20 分鐘。
5. HIER or Enzyme 前處理。PBS Wash, 2分鐘三次。
6.Immunoblock ,37°C,60分鐘(blocking non-specific binding)
7. Primary Antibody 60 分鐘。...
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