菌種活化:定義,步驟,操作過程,一般操作過程 | 合法醫療器材資訊網
要明白菌種活化的情況就需要了解菌種保藏方式和方法。目前國際國內常用的菌種保存方法包括:定期移植法、液體石蠟法、沙土管法、真空冷凍乾燥法、80℃ ...
定義把微生物從保藏斜面轉接到活化斜面上,使其活性得以恢復,相對而言活化斜面培養基中的營養更豐富些,從而使微生物活性恢復的同時恢復其優良的生產性能。
步驟1、配置菌種適宜生長的培養基。
2、將菌種從保藏狀態恢復到室溫狀態,比如將冷凍的菌種解凍。
3、將通過操作將保藏的菌種接種到培養基中培養,此步驟稱為菌種復壯。
4、挑選培養基茁壯的菌落,挑選其中部分菌落接種到新的培養基中培養,重複此步驟2-3次,從而得到生長良好的菌落培養基:LB培養基,對於含有質粒的菌種可以在活化培養後,接種到含有抗生素的平板上,進行篩選,然後將長出的菌落接種到斜面或者平板上保存。
操作過程 一般操作過程1、在無菌操作下,用無菌微量吸管,從已溶解的管中吸取50μL(或1-2滴)的菌液,滴入固態指定培養基(培養基編號及溫度示於菌株訂購單)某一邊緣附近,以劃線法接種於培養基。
2、將接種好的培養基置於指定溫度的培養箱中培養。
3、在無菌環境下,以沾有75%酒精的棉花擦拭外管,在火焰上加熱外管之尖端。滴數滴無菌水於加熱處,使外管破裂,再以硬棒敲破尖端。取出隔熱纖維紙和內管,以滅菌過的鑷子取出內管之棉塞。
4、(a)適用於細菌用無菌吸管,吸取0.3-0.5ml指定之液體培養基,滴入內管內,並輕微震盪(可用該吸管協助),直到均勻懸浮。(b)適用於黴菌、酵母菌用無菌吸管,吸取0.3-0.5ml無菌水,滴入內管內,待乾燥粉末溶解後,以無菌吸管吸取並滴入約含有5ml無菌水之試管內,輕微震盪使其均勻後,靜置30至60分鐘。
5、取0.1-0.2ml之菌體懸浮液於指定的平板培養基上,做劃線分離培養或做成一系列之稀釋,用無菌L型玻棒均勻塗抹,以檢驗菌種之純度及活化情形,而剩餘的菌體則全部移入指定的液體培養基內,並依指定的溫度培養之。
6、某些菌種經過冷凍乾燥保存後,遲滯期(lagp...
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