Overview of Protein Assays Methods | 合法醫療器材資訊網

Generally,bovineserumalbumin(BSA)workswellforaproteinstandardbecauseitiswidelyavailableinhighpurityandrelativelyinexpensive.Alternatively ...

タンパク質定量は、タンパク質抽出、精製標識または解析の実験ワークフローに必須な要素です。細胞溶解物をアッセイして、溶解工程の達成結果を検証し、貯蔵用または対照比較用に複数サンプルを基準化します。精製工程で得られたタンパク質をアッセイして、収量測定を行います標識反応が適切な化学量論で調製されていることを確認するには、一般的にビオチン標識された精製タンパク質、もしくはレポーター酵素へ結合した精製タンパク質をアッセイします。種々のサンプル中にはあらゆるタイプの化学物質が存在し得ることを考えれば、タンパク質成分を忠実かつ特異的に測定できるタンパク質アッセイ試薬は価値の高い存在と言えます。

Thermo Scientific Pierce Protein Assaysは、精度および互換性が非常に高く、多様な用途に対応するため、あらゆる実験用タンパク質サンプルを容易に測定できます。本ページはPierce Protein Assay製品をモデルにご紹介していますが、上記の原則および化学反応は、一般的にあらゆる比色タンパク質アッセイ法へ適用できます。

単離目的のタンパク質サンプルの処理、クロマトグラフによる分離と解析、電気泳動法および免疫化学法などを実行する前に、通例はタンパク質定量が必要です。利用可能なタンパク質の所要精度、分量および純度によって、適切なタンパク質濃度の測定法は異なります。

溶液中タンパク質をアッセイするには、280nm（UV範囲）による吸光度測定が最もシンプルかつダイレクトな方法です。芳香族側鎖（チロシン、トリプトファンおよびフェニルアラニン）を含有するアミノ酸は、強烈な紫外線吸収を示します。したがって、芳香族アミノ酸の含有量と総濃度に比例して、タンパク質とペプチドは紫外線を吸収します。HPLCによるアミノ酸解析の従来法では、ニンヒドリンまたは、o-フタルジアルデヒなどの着色や蛍光色素によって、全ての一級アミン（N末端及びリジン残基の側鎖）の標識を行います。紫外線の直接吸光法やHPLC試薬を用いた手法には特有の欠点...