IHC抗原修复实验方案 | 合法醫療器材資訊網

了解抗原修复的两种方法：热介导法（也称为热诱导表位修复或HIER）和酶法。·1.将切片脱蜡并复水。使用足量的抗原修复溶液覆盖载片且液面至少高出数厘米。·2 ...

大部分福尔马林固定的组织在免疫组化染色前需要进行抗原修复步骤。固定过程中形成的亚甲基桥会将蛋白交联起来，掩盖掉抗原位点。抗原修复方法则会破坏这些亚甲基桥，暴露出抗原位点，使抗体能够与之结合。用于抗原修复的两种方法分别为热诱导表位修复法 (HIER) 和酶修复法。

酶修复有时会破坏切片形态，因此需要对浓度和处理时间进行测试。

热诱导表位修复通常用压力锅、微波炉或蒸煮锅完成。有些实验室使用设置为 60 ℃ 的水浴槽，将切片置于修复溶液中孵育过夜。在处理高温加热时会从载片脱落的组织切片时，这种方法非常有效；特别是骨、软骨和皮肤。

若抗体数据表上没有说明抗原修复方法，则每个抗原的最佳修复方法必须通过实验确定。这一点也适用于选择用于热介导修复的缓冲液。最常用的缓冲液是 10 mM 的 pH 6 柠檬酸钠、pH 9 的 Tris-EDTA 以及 pH 8 的 EDTA。我们建议测试多种方法以寻找染色效果最佳的方法。

​用于热诱导表位修复的缓冲溶液

以下是 HIER 最常用的三种溶液，在没有数据表信息时，最好通过实验来选择修复缓冲液。

柠檬酸钠缓冲液（10 mM 柠檬酸钠，0.05% Tween 20，pH 6.0）

·         （二水合）柠檬酸三钠 2.94 g

·         蒸馏水 1 L

·         混合溶解，用 1N HCl 调节 pH 至 6.0。

·         加入 0.5 mL Tween 20...