免疫組織化學染色原理與步驟(immunohistochemistry | 合法醫療器材資訊網
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(一)、固定與切片 Fixation & Section組織切片前多以10% 福馬林固定Formalin fixation維持蛋白質型態,切片後會貼於有poly-L-lysine塗層之玻片上烤片,使組織固定在玻片上。
(二)、過氧化氫處理 Hydrogen peroxide組織內含有超氧化物歧酶Superoxide Dismutase ,SOD,尤其腦、肝、血液等含量特別高,因此若使用可見光呈色劑Chromogen作呈色時(DAB、AEC、HRP Green),需經過3% H2O2處理,使SOD破壞,減少Polymer HRP呈色的背景Background。
(三)、抗原修復 Retrieval福馬林固定石蠟包埋Formalin Fixation Paraffin Embedded ,FFPE中,由於甲醛的化學特性,能使不帶電荷的氨基酸間以亞甲基橋Methylene bridge(-CH2-)的方式形成交聯Cross-links。(Lys, Tyr, Trp, Cys, His, Arg, Asn, Gln)但Cross-links會導致肽Peptides及Epitopes的抗原性Antigenicity降低,因此透過抗原修復Retrieval來回復與Antibody bidding的能力。
(四)、阻斷劑 Blocking組織切片經過適當的Retrieval後,為了減少抗體對於組織的非專一性結合non-specific bidding產生,會使用BioTnA特別對於IHC優化的非血清性Non-rerum Immunoblocking reagent,可有效降低背景Background的產生。
(五)、抗體結合與沉澱 Antibody bidding & Precipitate組織切片經過適當的Retrieval後,使Methylene bridge打斷,便可使一級抗體Primary...
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