Western blot底片感光(壓片)技術@ 經驗,心得 | 合法醫療器材資訊網
201404261718Westernblot底片感光(壓片)技術?科學研究.在實驗室已經邁入10個年頭,其中最常接觸的實驗技術應該就是Westernblot了吧。有鑑於許多學弟妹 ...
在實驗室已經邁入10個年頭,其中最常接觸的實驗技術應該就是Western blot了吧。有鑑於許多學弟妹經常在底片感光技術上遇到許多麻煩和困難,所以這篇把底片感光時最常遇到的情形及問題整理一下,讓大家參考看看。有時為了得到一張可以放在論文上秀給大家看的Western blot圖,甚至花了一兩個月的時間也壓不出好片子,或是明明看的出來有趨勢,但礙於底片太髒而無法分析量化,真的是會灰心喪氣。願主耶穌讓這些資訊可以幫助大家減少try實驗條件所花的青春與時間,阿們。
底片顯像技術
在底片感光 各組樣品 某特定蛋白質的表現時,我們可以控制的試劑主要有:一抗、二抗、ECL反應試劑。而變因可以區分為 抗體稀釋比例、反應時間與溫度。現就各個顯像不佳狀況一一討論:
顯像不佳定義:
(一) Band太粗黑太深:
特徵:如標題右方band,黑到X@#%,很難分析
改善方式:
ü 減少曝光時間(上圖曝光10s,下圖曝光3s的結果)
...
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