免疫組織化學染色原理與步驟(immunohistochemistry | 合法醫療器材資訊網

ImmunohistochemistrystainingKit,IHC(forProtein)免疫病理化學染色(針對蛋白質)一、原理介紹Immunohistochemistry,IHC為具有專一性之呈色，藉由組織上 ...

(一)、固定與切片 Fixation & Section組織切片前多以10% 福馬林固定Formalin fixation維持蛋白質型態，切片後會貼於有poly-L-lysine塗層之玻片上烤片，使組織固定在玻片上。

(二)、過氧化氫處理 Hydrogen peroxide組織內含有超氧化物歧酶Superoxide Dismutase ,SOD，尤其腦、肝、血液等含量特別高，因此若使用可見光呈色劑Chromogen作呈色時(DAB、AEC、HRP Green)，需經過3% H2O2處理，使SOD破壞，減少Polymer HRP呈色的背景Background。

(三)、抗原修復 Retrieval福馬林固定石蠟包埋Formalin Fixation Paraffin Embedded ,FFPE中，由於甲醛的化學特性，能使不帶電荷的氨基酸間以亞甲基橋Methylene bridge(-CH2-)的方式形成交聯Cross-links。(Lys, Tyr, Trp, Cys, His, Arg, Asn, Gln)但Cross-links會導致肽Peptides及Epitopes的抗原性Antigenicity降低，因此透過抗原修復Retrieval來回復與Antibody bidding的能力。

(四)、阻斷劑 Blocking組織切片經過適當的Retrieval後，為了減少抗體對於組織的非專一性結合non-specific bidding產生，會使用BioTnA特別對於IHC優化的非血清性Non-rerum Immunoblocking reagent，可有效降低背景Background的產生。

(五)、抗體結合與沉澱 Antibody bidding & Precipitate組織切片經過適當的Retrieval後，使Methylene bridge打斷，便可使一級抗體Primary...