即時聚合酶連鎖反應（Real | 合法醫療器材資訊網

Real-timePCR跟傳統PCR不同之處在於前者可經由光學系統去監測反應中產物量(​螢光物質)的變化而反應在電腦上，後者則必須等反應結束後再進行洋菜膠體電泳 ...

防檢局　汪澤宏

一、前言

　　自從聚合酶連鎖反應(PCR)技術開發至今，幾乎是生物學門中最被普遍使用的技術。PCR主要是運用DNA的變性、黏合及延伸等三步驟的循環，連續增幅目標DNA片段。在人類的疾病或其他動植物的疫病蟲害檢測上，以PCR為基礎的技術都被廣泛的應用，諸如多重聚合酶連鎖反應(Multiplex PCR)、巢式聚合酶連鎖反應(Nested PCR)、逢機增幅多態型-聚合酶連鎖反應(RAPD-PCR)、序列特徵化增幅區域(SCARs)、聚合酶連鎖反應-限制性片段長度多態性(PCR-RFLP)以及即時聚合酶連鎖反應(Real-time PCR)等。其中Real-time PCR近年被使用的頻率逐漸提高，除了反應時間大量的縮短之外，儀器及技術的亦不斷的創新進步，真正可以做到兼顧到準確度、敏感度及高效率的多項優點。

二、Real-time PCR原理與方法

　　Real-time PCR跟傳統PCR不同之處在於前者可經由光學系統去監測反應中產物量(螢光物質)的變化而反應在電腦上，後者則必須等反應結束後再進行洋菜膠體電泳分析。Real-time PCR的配備主要有PCR機器、光學系統及電腦(如圖1)。隨著技術的改良進步，Real-time PCR在精確度及敏感度都優於傳統PCR。目前Real-time PCR螢光系統可大致分為「非探針型」及「探針型」。

(一)「非探針型」的系統就是在反應中加入會與雙股DNA嵌合而釋放出螢光的物質，目前最常被使用的螢光染劑是SYBR-green I，這種物質會嵌入在雙股DNA的小凹槽(minor groove)而釋放出可被偵測的螢光，所以當PCR產物越多時，嵌入的SYBR-green I就越多，釋放出的螢光也就越多。

(二)「探針型」系統相對上就較為複雜，反應中除了要有專一性的引子對之外，另外還要在引子對之間DNA序列中找到具有專一性的片...