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ELISA操作步骤.2013-08-2109:43.酶联免疫吸附实验材料,试剂,溶液.1.酶标板,100μltip头,1mlEp管,湿盒.2.包被稀释液(0.05mol/L碳酸钠-碳酸氢 ...
酶联免疫吸附实验材料,试剂,溶液
1.酶标板,100μltip头,1ml Ep管,湿盒
2.包被稀释液(0.05mol/L碳酸钠-碳酸氢钠buffer,pH 9.6)
碳酸钠0.15g,碳酸氢钠0.29g,叠氮钠0.02g,加双蒸水至100ml,调至pH 9.6
3. 封闭液(5%小牛血清/PBS溶液) 小牛血清5ml, 1*PBS(pH 7.4)95ml
4. 洗涤液(PBST, pH 7.4) NaCl 0.8g, KH2PO40.02g,Na2HPO4.12H2O 0.29g, KCl 0.02g,Tween20 0.05ml,叠氮钠0.01g,加双蒸水至100ml,调至pH 7.4
5. 样本稀释液(PBS, pH 7.4) NaCl 0.8g, KH2PO40.02g,Na2HPO4.12H2O 0.29g, KCl 0.02g,叠氮钠0.01g,加双蒸水至100ml,调至pH 7.4
6. 酶标第2抗体(羊抗兔)稀释范围1:5,000-1:100,000
7. 底物液(TMB-过氧化氢尿素溶液)
① 底物液A:TMB20mg,无水乙醇10ml,加双蒸水至100ml.
②底物液B(0.1mol/L柠檬酸-0.2mol/L磷酸二氢钠缓冲液, pH 5.0-5.4) Na2HPO41.46g, 柠檬酸0.933g, 0.75%过氧化氢尿素0.64ml, 加三蒸水至100ml,调至pH 5.0-5.4
③底物A和B按1:1混合即成TMB-过氧化氢尿素溶液. 8. 终止液(2mol/LH2SO4溶液)双蒸水200ml,浓硫酸34ml,(缓慢滴加并不断搅拌),加双蒸水至300ml 9. 0.9%生理盐水
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