Elisa的原理、操作及注意事项科研处 | 合法醫療器材資訊網
一、 Elisa简介
酶联免疫吸附测定法 (enzyme-linked immunosorbent assay),简称 ELISA,是用于检测体液中微量物质的固相免疫测定方法。它是一种特殊的试剂分析方法,是在免疫酶技术( immunoenzymatic techniques ) 的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术 。最初是在1971年由瑞典学者Engvail和Perlmann,荷兰学者Van Weerman和Schuurs报道的一项新成果。ELISA现在已成为目前分析化学领域中的前沿课题 。
二、 Elisa的基本原理
通过抗原与抗体的特异性免疫反应将待测物与酶连接,然后通过酶与底物产生颜色反应,用于定量测定。测定的对象可以是抗原也可以是抗体。
ELISA 的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化水解或氧化还原反应而成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,间接地放大了免疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度。
所生成有色产物的颜色深浅与欲测的抗原(抗体)含量成正比。 这种有色产物可用肉眼、光学显微镜、电子显微镜观察,也可以用分光光度计(酶标仪)加以测定。其方法简单,方便迅速,特异性强。
三、 Elisa 的类型
ELISA 可用于测定抗原,也可用于测定抗体。 在这种测定方法中有三个必要的试剂:
(1)固相的抗菌素原或抗体,即"免疫...
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