革蘭氏染色法Gram staining | 合法醫療器材資訊網
483948199/gettyimages.com此種染色法由丹麥微生物學家HansChristianGram於西元1884年所創,是最常用的細菌...媒染劑(Mordant):乃革蘭氏碘液(Gram'sIodine),可與初染劑結合而形成不溶性複合物。...取菌液均勻分散於載玻片上,可快速在酒精燈上加熱一下。...宜使用未超過24小時之新鮮培養,置備抹片。
此種染色法由丹麥微生物學家Hans Christian Gram 於西元1884 年所創, 是最常用的細菌鑑別染色法。步驟如下:
1.初染劑(Primary Stain):初染劑乃結晶紫(crystal violet),使細菌染成紫藍色。
2.媒染劑(Mordant):乃革蘭氏碘液(Grams Iodine),可與初染劑結合而形成不溶性複合物。所形成之結晶 紫-碘(CV-I)複合體藉以加強染料顏色,此時所有細菌均成紫黑色。
3.脫色劑(Decoloring agent):乃95%乙醇,此試劑具有脂溶性(lipid solvent) 與蛋白質脫水劑之雙重功能。其作用依微生物細胞壁所含脂肪濃度而定。[[格蘭氏 陽性菌]]之脂質含量低且細胞壁具有厚層之肽聚醣,乃保留CV-I 複合體之主要因素,因少量之脂質經乙醇作用,立刻溶解,形成細胞壁之細孔,但此細孔隨即因乙醇之脫水作用而封閉,以致緊密結合之初染劑不易移去,終於保留紫色。[[革蘭氏陰性菌]]細胞壁中之外層含高量之脂質,易為乙醇溶解,形成大孔。即使引起細胞壁蛋白之脫水也不易封閉該孔,因此有利於未結合CV-I 複合體之釋出,致使菌體成無色。
4.複染劑(Counterstain):最後試劑為番紅(Safranin),凡經上述脫色之細菌,被此染料染成紅色。因僅革蘭氏陰性菌發生脫色,故於此步驟能吸收複染劑。革蘭氏陽性菌則保留初染時之紫色。
革蘭氏碘液就是2% iodine + 3% potassium iodide 溶於 70% ethanol。
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