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技术人员将理解的是,该pKa将会随条件,如温度、浓度和溶剂的离子强度而...镶片镰孢菌Quinn(奎恩)(W000/56900)、米黑根毛霉脂肪酶、米黑根毛霉天冬氨...将悬浮液在32°C下在80rpm下孵育直到形成原生质体,并且然后用STC缓冲液 ...
蛋白质晶体在低pH下的再增溶序列表的引用
本申请包括计算机可读形式的序列表,将其通过引用结合在此。
发明领域
本发明涉及蛋白质纯化领域,具体涉及通过发酵过程制备的蛋白质的蛋白质纯化领域。
发明背景
工业蛋白生产的一个重要部分是将所希望的蛋白质从其中已经生成了蛋白质的产物混合物的其余部分中进行纯化。
在发酵工业中,蛋白质一般通过经设计或选择以产生大量所希望的蛋白质的特殊细胞产生。所生产的蛋白质可以被这些细胞分泌到细胞周围的体液中。已经在发酵期间产生蛋白质之后,一般在蛋白质处于预期形式和纯度之前在后续步骤中对其进行纯化。在纯化过程期间,通常将所产生的蛋白质从生产培养基的一种或多种组分中分离,并且通常涉及可溶性蛋白质从固体细胞物质中的分离。
如果蛋白质以足够高的量生产,那么其可以以结晶形式沉淀,这为通常发酵之后的纯化过程中造成了额外的挑战,因为蛋白质需要是可溶的以便从产物混合物的固体细胞物质和/或其他固体组分中分离。在这种情况下,可以用另外的水或能溶解已沉淀的蛋白质的其它流体稀释产物混合物。然而,即使稀释该产物混合物可以解决在产物混合物中沉淀的蛋白质的问题,但这是一个不太希望的解决方案,因为这也意味着体积增大,并且因此随后的纯化设备必须能够处理由于稀释产生的更大的体积,这通常意味着更多的投资和更高的操作花费是必需的,以应对增加的体积。
因此,需要一种使用于分离过程的蛋白质产物再增溶的方法,其中再增溶发生而不引发体积的高度增加。
发明既述
在第一方面,本发明涉及用于纯化如下过程中蛋白质产物的方法,其中该蛋白质的至少一部分具有位于该蛋白质表面上的2-6个组氨酸残基;该过程包括以下步骤:
a.提供发酵液,
b.任选地将pH调节至低于组氨酸侧链的pKa的值;
c.任选地保持该混合物一段时间;并且
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