南方墨點法 | 合法醫療器材資訊網
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薩瑟恩墨點法,或南方墨點法(英語:Southern blot),是由英國生物學家埃德溫·薩瑟恩於1975年發明,並因此得名,是一種普及的分子生物學實驗技術。目的是偵測經由膠體電泳分離的樣品中,含有特定序列的去氧核糖核酸片段。
通常,先利用膠體電泳分離去氧核糖核酸(DNA)樣本中各種不同大小的分子。不同大小的分子在膠體電泳之後,會分離而散佈在膠體上不同的位置。接著,這些DNA分子可以利用虹吸作用,轉染到一個薄膜上,經由DNA變性使它們的雙股分開。因為雙股DNA已經固定在薄膜上,所以變性後無法再形成雙股螺旋;然後將上述薄膜暴露在雜交探針(probe)裡,讓探針和DNA雜交(hybridize)。探針是會產生放射線、或可以放出顏色或螢光的物質標記的單股DNA或核糖核酸(RNA)片段;最後是觀察結果。薄膜上可以偵測到放射性或者螢光訊號的位置,就是含有可以與探針核酸序列進行偶合的去氧核糖核酸樣本散佈的位置。
類似的技術也被用來偵測經由膠體電泳分離的樣品中,含有特定序列的RNA片段,當應用在RNA的偵測時,被稱為北方墨點法。
基本原理及過程概述[編輯] 基本原理[編輯]薩瑟恩雜交是利用標記的探針(probe)與轉印膜上靶DNA片段進行雜交的技術,檢測DNA片段中是否存在與探針同源的序列。雜交過程是高度特異性的,可以根據所使用的探針(序列已知)進行特異性的靶序列檢測。
基本過程[編輯] 從細胞或組織中用酚/氯仿反覆抽提蛋白質並用無水乙醇沉澱的方法製備基因組DNA(gDNA); 限制性酶切基因組DNA; 將酶切產物電泳分離(electrophoretic separation); 毛細轉印或電轉印並固定於NC...溶液移轉針 | 合法醫療器材資訊網
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