南方墨點法與北方墨點法 | 合法醫療器材資訊網
2013年10月31日—南方墨點法(Southernblot)是由英國生物學家SirEdwinSouthern發明,並因此得名(Southern為南方之意),是一種十分常用的分子生物學實驗技術。其用途是 ...
南方墨點法 (Southern hybridization) 與北方墨點法 (Northern hybridization) 國立臺灣師範大學生命科學系碩士生何懿洲
南方墨點法 (Southern blot) 是由英國生物學家Sir Edwin Southern發明,並因此得名(Southern為南方之意),是一種十分常用的分子生物學實驗技術。其用途是利用基因探針去偵測由膠體電泳分離出來的DNA片段,以搜尋到含有特定序列的DNA片段。
北方墨點法是由史丹佛大學的James Alwine and George Stark所發明,將所要偵測的樣本DNA片段改為RNA片段,而之所以稱為北方墨點法是因為先有「南方」墨點法,接下來發明的墨點法仍以方位命名,例如繼北方墨點法之後又有西方墨點法(Western blot),它們皆與實際方位無關。
南方墨點法是利用標記的探針(probe)與轉印至膜上的標靶DNA片段進行雜交,來檢測標靶DNA片段中是否存在與探針同源的序列。雜交過程是利用DNA分子的高度特異性,可以根據所使用的已知序列探針進行特異性的標靶DNA片段檢測。
先利用膠體電泳分離DNA樣本中各種不同大小的序列片段。不同大小的序列片段在膠體電泳之後,會因分子量大小不同而分佈在膠體上不同的位置。並將膠體上分離過後的DNA序列片段轉印到一個薄膜上,接著經由DNA變性使它們的雙股分開。
然後將上述薄膜暴露在雜交探針(probe)裡,探針是已被標記會產生放射線、或可以放出顏色或螢光物質的單股DNA或核糖核酸(RNA)片段,讓探針和DNA雜交(hybridize)。最後是觀察結果,薄膜上可以偵測到放射性或者螢光訊號的位置,就是含有可以與探針核酸序列進行偶合的DNA。
北方墨點法Northern hybridization是利用標記的探針(probe)與轉印膜上標靶RNA片段進行雜交,來檢測標靶RNA片段中是否存在與探針同源的序列。雜交過程與南方墨點法一樣是利用DNA與RNA分子高度特異性的原理,...
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