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Western-blotting | 蛋白萃取方法及注意事項

在實驗過程中，我們常常需要藉由萃取細胞組織中的蛋白質，來觀察蛋白質表現量的變化。樣品蛋白質萃取品質的好壞非常重要，對實驗結果影響甚大，因此以下介紹蛋白質萃取方法及注意事項：

蛋白質樣品製備原則

實驗前要先充分了解實驗目的，根據實驗、分析的蛋白質，再決定如何進行樣本前處理，找出最適合的實驗方法。原則盡可能去除非蛋白質的物質，保留蛋白質，

保留蛋白質: 維持低溫處理、添加蛋白酶抑制劑可減少蛋白質降解。去除核酸、多糖和脂類等可能產生干擾的大分子物質。依實驗目的選擇蛋白質裂解液

蛋白質裂解液(Lysis Buffer)常見成份

蛋白質裂解液(Lysis Buffer) 的基本組成為: pH緩衝液 (pH Buffer)、離液劑(chaotropes)、表面活性劑(sufactants/detergents)、鹽類、還原劑(reducing agent)、蛋白酶抑制劑(protease inhibitor) 以及磷酸酶抑制劑(phosphatase inhibitor)。常見的蛋白質裂解液配方：ACE Biolabs 1X RIPA Lysis Buffer (C1020)[1] 25 mM Tris-HCl pH7.6, 150 mM NaCl, 1% NP-40, 1% Sodium deoxycholate, 0.1% SDS，絕大多數細胞或動物組織樣品皆可以此配方為基底，依照實驗目的添加離液劑、介面活性劑、還原劑、蛋白酶抑制劑以及磷酸酶抑制劑，或調整其濃度。

離液劑(chaotropes)：也稱為變性劑，可以破壞氫鍵等次級鍵，增加蛋白質的溶解性。代表試劑為尿素(Urea)及硫脲(thiourea)。常用含 5...

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Tris | 合法醫療器材資訊網

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Vitamin D3接受器SUMOylation對其基因轉錄活性的影響 ... | 合法醫療器材資訊網

作用完後，利用DNA clean/extraction kit將DNA純化出來，進. 行PCR反應。 ○ 試劑溶液配製：. SDS lysis buffer, pH 8.1. 50 mM Tris-HCl, pH 8.1. Read More

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2018年12月25日 — Preparation of lysis buffer for blood DNA extraction: ... Two different combinations of solutions are used for lysis buffer preparation, ... Read More

二、實驗材料與方法 | 合法醫療器材資訊網

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真菌(細菌)DNA抽取法之常用緩衝液配製 | 合法醫療器材資訊網

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去氧核醣核酸(DNA)萃取 | 合法醫療器材資訊網

組織與血液則同時以溶解細胞緩衝溶液(lysis buffer: 100m M Tri @ @ ftcmy. ... 組織之去氧核醣核酸的萃取是根據Puregene DNA isolation protocol (Gentra Systems, ... Read More

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