引子合成常見問題與解答(FAQ) | 合法醫療器材資訊網
將DNA/RNA溶液進行適當稀釋,使吸光度測定值與樣品濃度的關係在直線範圍內,再根據原溶液的總體積與稀釋...PCR產物經克隆後定序發現,引子處的鹼基有錯誤,為什麼?
Q-1. 合成的引子是什麼形態?
A-1. 合成的 Oligo DNA 產品呈白色乾粉或無色透明,這都為正常形態。由於 oligo DNA 產品都是經過高速離心抽乾,所以在運輸的過程中由於顛簸容易使其脫離管底而全部或部分被附著於離心管壁或管蓋上,所以建議您使用前務必請先離心收集 Oligo DNA 製品於管底,然後再溶解 Oligo DNA 製品,以防損失而影響您的實驗。
Q-2. 如何對合成 DNA/RNA 製品進行定量?
A-2. 由於核酸在 260nm 附近有強吸收,因此根據此性質,用紫外分光光度計測定核酸溶液在260nm的吸光度值,據此對核酸進行定量,用 OD 值來表示。 1 O.D. 是指:置於光路徑長度為1cm的比色皿中的 DNA/RNA 溶液,如果其在 260nm 處的吸光度值為1,則稱1ml該溶液中溶解的 DNA/RNA 的量為1 O.D.。1 O.D.值的合成 DNA/RNA 的品質約為 33μg。
Q-3. 如何測定並計算OD值?
A-3. 將DNA/RNA溶液進行適當稀釋,使吸光度測定值與樣品濃度的關係在直線範圍內,再根據原溶液的總體積與稀釋倍數計算該溶液的總 OD 值。例如,一個 200μl 的 DNA/RNA 溶液,如果對其進行6倍稀釋,測定值為1.0 時,則該溶液的總 ...
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