核酸萃取之管柱純化 | 合法醫療器材資訊網
![核酸萃取之管柱純化](https://i.imgur.com/6y29Lx7.jpg)
2017年11月13日—上述文章中提到,核酸萃取的方式有許多種,包括管柱萃取純化法(ColumnPurification)、試劑萃取純化法(有機溶劑萃取法與非有機溶劑萃取法)以及磁珠 ...
![核酸萃取之管柱純化](https://i.imgur.com/6y29Lx7.jpg)
上述文章[1]中提到,核酸萃取的方式有許多種,包括管柱萃取純化法(Column Purification)、試劑萃取純化法(有機溶劑萃取法與非有機溶劑萃取法)以及磁珠萃取純化法等。在本篇文章主要介紹管柱萃取純化法。
管柱萃取純化法具有操作簡單、回收率高及性能穩定的特點[1]。而目前大多數的實驗室及檢驗單位,在檢體量不多的情況下,多以管柱萃取純化法純化核酸,其利用濾膜作為核酸的特異性吸附材料,濾膜上含有矽,能透過鹽類及pH值來調整對核酸的吸附能力(圖一),但對其他物質,如:蛋白質、離子、鹽類並不會吸附,因此能夠有效回收並純化樣品中的DNA/RNA[1]。以目前最常見的spin column為例,其分成集液管、Column、墊片及濾膜等(圖二) [1]。
圖一、管柱上的矽-用於核酸吸附
圖二、spin column主要四個部分:集液管、Column、墊片及濾膜
管柱萃取純化法其原理與磁珠核酸萃取類似,都是以鹽類及pH值來控制矽對核酸的吸附能力,只差在一個用磁珠,一個用濾膜。
管柱萃取純化法其操作步驟主要如下(圖三)[2]:
1. 先以陰離子性清潔劑將細胞溶解
2. 加入試劑使蛋白變性及抑制DNase的活性
3. 接著加入蛋白分解酶K(Proteinase K),分解細胞內及DNA上的蛋白質(histone),增加回收率
4. 將以上混合物加入Column當中,DNA會吸附於濾膜上
5. 接著透過wash buffer、乙醇將DNA以外的...
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