Luciferase Assays and BioTek Synergy Microplate Reader ... | 合法醫療器材資訊網

Theassayswereinitiatedbyasinglereagentinjectionandthedualluminescentsignalswerereadeithersequentially,SynergyH1andH4,orsimultaneously ...

レポーターアッセイは、様々な生体中における環境刺激に応じた遺伝子発現の制御機構を解析するため、長年にわたって利用されてきた手法です。レポーターコンストラクトは、遺伝子制御因子をレポーター遺伝子上流に挿入することによって構築し、その後このコンストラクト（一般的にはプラスミド）を標的細胞または生体に導入します（図1）。ルシフェラーゼに基づくレポーターアッセイ法が開発されたことで、広範な実験条件下で低バックグラウンド干渉な、新たなシグナル検出法が実現しました［1］。ルシフェラーゼレポーターアッセイにおいて、ルシフェラーゼは制御因子によって発現が調節され、その発光シグナルを測定することで、シグナル伝達経路に影響する解析対象因子の活性を定量することができます（図2）［2］。

図1. Thermo Scientific pMCS--Gaussia Lucレポーターコンストラクト。 目的の制御因子は、ルシフェラーゼレポーター遺伝子上流のマルチクローニングサイト（MCS）に挿入することができます。 培養にピューロマイシンまたはアンピシリンを添加することで選別が可能です。

図2. ルシフェラーゼレポーターアッセイの概略図

多種多様なルシフェラーゼ変異体が、過去数十年にわたって発見されてきました。その多くは、発光のために固有の基質および補因子を必要としますが、そうでないものもあります。さらに重要なことに、生成される光は、その発光スペクトルのみならず、安定性および明度についても異なる場合があるということです［2］。複数タイプのルシフェラーゼが発見されたことは、マルチプレックス化実験において複数のレポーターコンストラクトを利用するアッセイの開発に、当然のことながら役立ちました。デュアルレポーターアッセイでは、単一の生体または細胞において、異なる2種類のルシフェラーゼを組み合わせて使用することがよくあります。このような場合、一方のルシフェラーゼは、...