Gene Cloning | 合法醫療器材資訊網

2019年5月3日—傳統上通常會使用聚合酶連鎖反應(polymerasechainreaction,...Tm：此為50%引子和DNA黏合時的溫度，由長度和序列決定，長度越長，GCcontent越 ...

Gene Cloning

實驗室常常會聽到 “cloning” 這個詞，老師偶爾會請你 “cloning” 一段基因，到底 “cloning” 是什麼意思呢？Cloning 指的是從一團多樣的 DNA 片段混合物中，挑選出特定的序列片段，黏接到「載體」上。將「載體」送到研究目標中 (如細菌和細胞)，並在目標中大量表現，來研究此特定序列對於目標的影響。

傳統上通常會使用聚合酶連鎖反應 (polymerase chain reaction, PCR)，「夾」出特定目標片段，此步驟有時需要一定的運氣，需要嘗試不同的「夾子」和反應條件。而近代科技的進步則推出另外一種方法——直接使用化學的方式全序列合成，不過此方法非常昂貴。

Cloning 大致可以分成四步：

此步驟為聚合酶連鎖反應的前置作業，必須先獲得含有目標片段的混合物。可以是染色體 DNA 或是由 RNA 反轉錄形成的 cDNA (complementary DNA)，而抽取的來源可以是細菌、細胞或是動植物組織。同一種 DNA 類型 (染色體或 cDNA) 抽取原理差不多，不同來源可能會有些微差異，差異主要是破細胞的部分，比如說組織必須先均質化，去掉一些組織間質，而細菌有細胞壁，相比於細胞而言較難破壞。現在為了方便科學家的研究，都有對應的套組。最後得到的 DNA 在下個步驟...