細胞結構成分的離心分離技術 | 合法醫療器材資訊網

2015年7月1日—差速離心法（diffrentialcentrifugation）通過一系列遞增速度的離心，將不同大小顆粒分離。先在低速離心條件下把大的顆粒沉降到管底，其它顆粒留在 ...

就像可以把细胞从组织中分离出来进行研究一样，人们也可以把细胞器从细胞中分离纯化出来，以研究它们各自特有的的化学组成、酶活性和代谢特点。尽管在一个世纪前就有人试图分离细胞器，但直到20世纪40年代有了超速离心机和细胞匀浆技术后，才真正建立了细胞器的分离技术。用这一技术可以获得相对纯净的各种细胞器和大分子颗粒。使用超速离心机是这一技术的关键，因此该技术称为细胞结构成分的离心分离技术。

要进行细胞结构成分的离心分离，需先破碎细胞，通常用渗透压休克、超声振荡或研磨等方法。破碎细胞的悬液称为匀浆，其中包含了核、线粒体、高尔基体、溶酶体、过氧化物体等多种膜包围的囊泡，还可以有内质网形成的囊泡－微体，它们各有特定的大小和密度，因此可以用高速或超速离心的方法分开。

一．离心分离技术的基本原理和方法

用超速离心机分离各种细胞结构成分有多种方法，它们都是根据颗粒或分子在离心场中的运动原理来设计的。悬浮液中的颗粒在离心力场中的沉降速度除了与颗粒的质量有关外，还与颗粒的密度、体积以及悬浮介质的密度和粘度有关，悬浮液中颗粒或分子的沉降速度可用stokes公式来表示。

dX 2r2 ( ρp— ρΜ)

dt 9η

式中dX/dt为颗粒沉降速度，X为颗粒到转轴中心的距离，t为时间，r为颗粒直径，ρp为颗粒密度，ρΜ为介质密度，η为介质密度，g为作用于颗粒的离心力。从公式中可以看到，颗粒在离心力场中的沉降速度与颗粒对介质的密度差ρp-ρΜ有重要关系：当ρp>ρΜ时，沉降速度为正数，颗粒向管底沉降；当ρp<ρΜ 时，沉降速度为负数，颗粒向管上方移动；当 ρp =ρΜ 时，沉降速度为零，颗粒悬浮在介质中不移动。这一基本原理是差速离心和等密度区带离心方法的主要依据。

根据Stokes公式，如果在相同的离心力场中，不同颗粒的沉降速度只决定于r、ρp、ρM和η4个因素。在实际应用中,不必分别测定这4个因素的具体数值,而是用沉降系数s (se...