一篇搞懂Western Blot實驗流程步驟 | 合法醫療器材資訊網

2018年8月21日—A.實驗原理-WB（WesternBlot）即蛋白轉漬法，其原理是通過特異性抗體對電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色。通過分析著色的位置和 ...

想當年，接觸Western Blot的時候也是一頭霧水，請教實驗室的前輩們，摸老半天，發現和自己的實際狀況仍搭不上邊......（暈）就這樣，決定自己親自探索這條科(不)研(歸)路。

你是否也有摸不著頭緒的狀況呢？來，這些是我根據ABclonal公司多年的國外研發團隊實戰經驗整理出來的WB實驗精華，大方送給共患難的你啦！

◆◆◆◆實驗流程◆◆◆◆ A.實驗原理 WB（Western Blot）即蛋白轉漬法，其原理是通過特異性抗體對電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色。通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白在所分析的細胞或組織中的表達情況的訊息。 B.實驗步驟 Western Blot一般由樣本處理、凝膠電泳、樣品的轉漬和免疫學檢測組成。 1. 樣本製備 WB中檢測樣本來源主要是細胞、組織、微生物、植物等蛋白樣本；在WB檢測中，樣本中蛋白提取的是否充分，在整個WB檢測中非常的重要。樣品提取的方法常見的為機械法、物理法和化學及生物化學方法。

a：機械法 * 高速組織搗碎機（轉速可達10000

rpm，具高速轉動的鋒利的刀片），用於動物內臟組織的破碎； * 玻璃勻漿器（用兩個磨砂面相互摩擦，將細胞磨碎），適用於少量材料，對細胞破碎程度較高速搗碎機高，機械切力對分子破壞較小

b：物理法反覆凍融法、冷熱交替法、超聲波法、加壓破碎法

c：化學及生物化學方法 * 有機溶媒法、自溶法、酶法、表面活性劑處理； * 樣本經過處理後，使樣本中的蛋白能夠解離出來，用於後續的檢測； * 現在常用的提取方法是以上幾種方法聯用，最常見的就是RIPA裂解液。其中根據蛋白性質的不同，我們選擇的裂解液也不一樣。...

醫學研究部共同研究室 | 合法醫療器材資訊網

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