【ELISA酵素免疫分析之研發與設計】HRP抗體標誌半抗原 ... | 合法醫療器材資訊網

酵素免疫分析法(Enzyme-linkedimmunosorbentassay(ELISA)）為利用抗原抗體間...直接標誌，則可直接wash後，兩者一樣加入酵素受質反應後以ELISA讀值。

ELISA酵素免疫分析介紹

酵素免疫分析法 (Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)）為利用抗原抗體間專一性鍵結之特性，對檢體進行檢測；可應用於檢體抗原或抗體之檢測。由於結合於固體承載物上之抗原或抗體仍具免疫活性，因此設計其鍵結機制配合酵素呈色反應，可顯示特定抗原或抗體是否存在，並可利用呈色之深淺以進行定量分析。根據待測樣品與鍵結機制之不同，ELISA可設計出各種不同類型的檢測方式，主要以三明治法、間接法、以及競爭法三種方式為主。

三明治法（sandwich）ELISA酵素免疫分析

三明治法常用於檢測大分子抗原，一般操作步驟為:將具有專一性之抗體 (Captured antibody)固著於塑膠孔盤上，洗去多餘抗體。加入待測檢體，檢體中若含有待測之抗原，則其會與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結。洗去多餘待測檢體，加入對抗原專一之一次抗體(detected antibody)，與待測抗原進行鍵結洗去多餘未鍵結一次抗體(detected antibody)，加入帶有酵素之二次抗體( anti-mouse antibody)，與受質反應後ELISA讀值。若Detected antibody具Biotin標誌或HRP標誌；biotin標誌，則加入streptavidn-HRP； HRP直接標誌，則可直接wash後，兩者一樣加入酵素受質反應後以ELISA讀值。兩種抗體 (Captured antibody and detected antibody)對檢體中的抗原進行兩次專一性辨認，專一性相當高，但待測抗原必須是多價抗原，才可獲得兩種以上的專一性抗體，分別進行夾心；此法需要足夠的表位空間，以進行抗原抗體的夾心，所以並不適用於半抗原或小分子抗原等分子量較小之標的。

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