獻給初學者：WB 如何1 分鐘蛋白定量（送模板） | 合法醫療器材資訊網

2018年2月27日—蛋白定量至少有5種方法：BCA，Bradford，雙縮脲法（Biuret...吸光度值從465nm變成595nm，最後測定595nm的OD值來計算蛋白質濃度。

不管是臨床醫生和科研工作者，我覺得二者的共同敵人都是一致的，那就是時間。作為一個臨床醫生，沒（zen）事（me）兒（ke）的（neng）時候搞搞科研，必須想盡一切辦法對付（擠出）時間。

去年，我們已經成功把 WB 一抗過夜之前的操作時間縮短為 1.5 小時，這樣有更多的時間來看（he）文（ka）獻（fei）了，最大的好處是天黑之前或者下班之後隨時都可以開始 WB，不用擔心細胞處理時間長或不能回家過夜的問題了。

不瞭解的同學可以看看這篇《獻給初學者：WB 也有基本套路》，毛老師在丁香園公開課裡詳細解釋了原理和操作，粉絲們的評價還不錯。

雖然 WB 的時間大大縮短了，但毛老師依然有點小小的不滿意。因為在開始 WB 之前的蛋白定量耗費時間還有點長，如果用 BCA 法的話光孵育就需要半個小時，整個過程耗時接近 1 小時。因此為了配合快速 WB，我們同樣需要一個快速蛋白定量的方法。因此今天我們來聊聊如何 1 分鐘測出蛋白濃度。

蛋白定量法

開始之前我們有必要複習一下理論知識。蛋白定量至少有 5 種方法： BCA，Bradford，雙縮脲法（Biuret 法），Folin 法（Lowry 法）和紫外分光光度計法。

BCA 法的原理是在鹼性條件下，氨基酸將二價銅還原為一價銅與 BCA 形成紫顏色的絡合物，測定 562 nm 的 OD 值，所以如果樣本里有還原劑（比如 DTT）的話就會對 BCA 的結果產生干擾。

Bradford 法（考馬斯亮藍法）是在酸性條件下，加入考馬斯亮藍 G250 與蛋白質（主要是鹼性或芳香族氨基酸）結合為藍色化合物，吸光度值從 465nm 變...