核酸萃取之管柱純化 | 合法醫療器材資訊網

2017年11月13日—...包括管柱萃取純化法(ColumnPurification)、試劑萃取純化法(有機溶劑萃取法與非...管柱萃取純化法其原理與磁珠核酸萃取類似，都是以鹽類及pH值來控制矽對...管柱萃取純化法的應用能用於RNA分離、質體分離、PCR模板 ...

   上述文章[1]中提到，核酸萃取的方式有許多種，包括管柱萃取純化法(Column Purification)、試劑萃取純化法(有機溶劑萃取法與非有機溶劑萃取法)以及磁珠萃取純化法等。在本篇文章主要介紹管柱萃取純化法。

    管柱萃取純化法具有操作簡單、回收率高及性能穩定的特點[1]。而目前大多數的實驗室及檢驗單位，在檢體量不多的情況下，多以管柱萃取純化法純化核酸，其利用濾膜作為核酸的特異性吸附材料，濾膜上含有矽，能透過鹽類及pH值來調整對核酸的吸附能力(圖一)，但對其他物質，如：蛋白質、離子、鹽類並不會吸附，因此能夠有效回收並純化樣品中的DNA/RNA[1]。以目前最常見的spin column為例，其分成集液管、Column、墊片及濾膜等(圖二) [1]。

圖一、管柱上的矽-用於核酸吸附

圖二、spin column主要四個部分：集液管、Column、墊片及濾膜

    管柱萃取純化法其原理與磁珠核酸萃取類似，都是以鹽類及pH值來控制矽對核酸的吸附能力，只差在一個用磁珠，一個用濾膜。

管柱萃取純化法其操作步驟主要如下(圖三)[2]：

1. 先以陰離子性清潔劑將細胞溶解

2. 加入試劑使蛋白變性及抑制DNase的活性

3. 接著加入蛋白分解酶K(Proteinase K)，分解細胞內及DNA上的蛋白質(histone)，增加回收率

4. 將以上混合物加入Column當中，DNA會吸附於濾膜上

5. 接著透過wash buffer、乙醇將DNA以外的...