Multicolor flow cytometry 實驗設計技巧與注意事項 | 合法醫療器材資訊網

2020年9月9日—組織樣本（可能含有巨噬細胞(Macrophages)）的均質化步驟、或是Daudi和THP-​1等細胞株染色前，均建議添加使用FcR阻斷劑。透過實施以上5 ...

Multicolor flow cytometry 實驗設計技巧與注意事項

流式細胞技術 (Flow cytometry) 是一項可以同時鑑定和分析多種抗原的強大工具。然而，隨著待測抗原與所使用的螢光染劑數量的增加，也同時加深了實驗設計的複雜度與困難度。以下提供 5 個設計要點與配色技巧，協助您更輕鬆快速地設計好多色流式細胞分析實驗 (Multicolor flow cytometry)。

在開始設計多色流式細胞分析實驗前，必須預先確定實驗室流式細胞儀所搭載的：(1) 雷射光源類型與數量、(2) 螢光濾片種類、(3) 偵測器數量。根據以上資訊，才能知道有哪些螢光染劑可以作為設計實驗時的選項。簡單來說，雷射光源決定哪些激發波長 (Excitation wavelength) 的螢光染劑可以適用，螢光濾片與偵測器則決定哪些發射波長 (Emission wavelength) 的螢光染劑訊號可以通過並被檢測得到。

某些細胞本身就極為罕見數量稀少，某些待測抗原則可能因為細胞活化狀態或細胞功能的不同而表現量較低。針對這些情況，一般會選用最亮的螢光染劑進行偵測，例如：PE 染劑通常會用在罕見細胞族群以及抗原表現量較低（或表達情況不明）的樣本偵測。而當待測抗原是高表現量時，則建議使用較暗的螢光染劑進行偵測，例如 PerCP。要特別提醒的是，還有諸多因素會影響到螢光染劑的亮度，例如使用的實驗緩衝液以及流式細胞儀機型等。您可以透過【Fluorochrome Chart】[1]快速查詢到各種常用螢光染劑的相對亮度、適用雷射光源等資訊。