【ELISA檢測原理】Sandwich Competition ELISA | 合法醫療器材資訊網
雙抗夾心法ELISA檢測原理 -Sandwich ELISA
雙抗夾心 ELISA 法是指將特異性針對待測抗原的抗體包被於 96 孔微孔板 中,製成固相載體,向微孔中分別加入標準品或標本,其中待測抗原與連接於 固相載體上的抗體結合,然後加入生物素化的針對待測抗原的抗體,形成夾心, 將未結合的生物素化抗體洗淨後,加入 HRP 標記的親和素,再次徹底洗滌後加 入 TMB 底物顯色。TMB 在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,並在酸的作用下 轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測抗原呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(O.D.值),用於樣本中待測抗原濃度測算。
原理圖如下:
競爭抑制ELISA檢測原理-Competition ELISA
競爭抑制ELISA法是指將特異性抗體吸附於固相載體,隨後加入待測抗原(標準品和樣本)和一定量的生物素標記的抗原(檢測液A),使二者競爭與固 相抗體結合,溫育後經洗滌去掉未結合物,然後加入HRP標記的親和素,經過溫育和徹底洗滌後加入底物 TMB 顯色。TMB 在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,並在酸的作用下轉化成最終的黃色。待測標本濃度越高,標記抗原和抗體的結合就越受到抑制,顯色愈淺。顯色的深淺與酶量呈正相關,而與樣品中待測物質含量呈負相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(O.D.值),計算樣品濃度。由於生物大分子可標記多個生物素,而生物素可以特異性結合酶標親和素,放大檢測信號,提高免疫分析敏感性。
小分子抗原或半抗原因僅有單個抗原表位,缺乏雙抗體夾心法所需的基本條件——具有2個或2個以上表位,所以對其常用競爭法進行測定。其原理是將待檢抗原和酶標抗原與相應固相抗體競爭結合,標本中抗原越多,與固相抗體結合的酶標抗...
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