聚合脢連鎖反應(Polymerase Chain Reaction | 合法醫療器材資訊網

由於嗜熱細菌生活在溫度達到50至80°C(122至176°F)的間歇泉中，它的DNA聚合酶具有耐熱性。在用於PCR反應時，高溫並不能破壞這種DNA聚合酶，因此不需要 ...

一、成分 1.DNA 模板：雙股螺旋DNA 經高溫解離成單股DNA，作為PCR 反應的模版。以一般反應體積為50uL 而言，只需1~100ng 的DNA 就非常足夠了，太多的DNA 反而會降低反應的專一性。 2.Primer 引子：功能就像衛星導航一樣，能找到目標基因片段的頭、尾兩端。一般反應濃度約為0.2~0.4uM，太高或太低都不恰當，濃度太高時會降低反應的專一性，太低時反應就會失敗。 3.DNA Polymerase 聚合?：能將4 種核酸原料（dNTPs：dATP、dGTP、dCTP、dTTP）依照DNA 模板密碼，正確地一個一個地加上去，而合成新的ㄧ股基因片段。聚合脢的種類繁多，依其特性大致上可區分成一般聚合脢（Taq）、熱啟動（Hot-Start）聚合脢、校正（Proofreading）聚合脢三類。 4.MgCl2 氯化鎂：可提供鎂離子作為聚合?的輔因子，輔助聚合脢作用。一般都使1.5~2.0mM。若濃度太高，雖然可以增加PCR的產量，但是專一性會大幅降低；若濃度太低，則PCR 產量會大幅降低。 5.緩衝液：主要是由Tris、KCl 所調配成的緩衝液，pH 約8.4 資料來源：toxicologyguide[1] 二、步驟 1. Denaturation：利用高溫（90~95℃）將雙股螺旋DNA 解離成單股DNA，再以單股DNA 作為複製的模板。 2. Annealing：溫度降低到適當溫度（不同的primers 其annealing溫度會有不同），讓引子黏結到正確的目標基因位置。（參考圖2的步驟2） 3. Extension：溫度調整到72℃，鎂離子作為酵素輔因子，讓DNA聚合脢依照模板上的密碼，開始將核酸原料（dNTPs）一個接著一個的加上去，合成另一股新DNA 片段。連續地重複30~40 次上面的三個步驟，只需要2 小時，理論上即可以將極微量的DNA 片斷大量複製約230~40倍（約幾十億倍）。資料來源：genedragon[2] 資料來源：紐芬蘭紀念大學[3] 三、為了提升PCR 的效率（efficiency）或專一性（specificity），常需視不同的基因片段而要加入某些添加劑（Additives），例如：DMSO ...

一篇搞懂PCR反應條件的選擇 | 合法醫療器材資訊網

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PCR循环参数—成功的六大关键因素 | 合法醫療器材資訊網

我们的在线工具以此法为基础，为指定DNA聚合酶计算建议的引物退火温度。 Tm 计算需考虑的一个重要因素是PCR添加剂、辅助溶剂和修饰核苷酸的使用。这些 ... Read More

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