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2019年11月20日—蛋白質裂解液(LysisBuffer)的基本組成為:pH緩衝液(pHBuffer)、離液劑(​chaotropes)、表面活性劑(sufactants/detergents)、鹽類、還原 ...

Western-blotting | 蛋白萃取方法及注意事項

在實驗過程中，我們常常需要藉由萃取細胞組織中的蛋白質，來觀察蛋白質表現量的變化。樣品蛋白質萃取品質的好壞非常重要，對實驗結果影響甚大，因此以下介紹蛋白質萃取方法及注意事項：

蛋白質樣品製備原則

實驗前要先充分了解實驗目的，根據實驗、分析的蛋白質，再決定如何進行樣本前處理，找出最適合的實驗方法。原則盡可能去除非蛋白質的物質，保留蛋白質，

蛋白質裂解液(Lysis Buffer)常見成份

蛋白質裂解液(Lysis Buffer) 的基本組成為: pH緩衝液 (pH Buffer)、離液劑(chaotropes)、表面活性劑(sufactants/detergents)、鹽類、還原劑(reducing agent)、蛋白酶抑制劑(protease inhibitor) 以及磷酸酶抑制劑(phosphatase inhibitor)。常見的蛋白質裂解液配方：ACE Biolabs 1X RIPA Lysis Buffer (C1020)[1] 25 mM Tris-HCl pH7.6, 150 mM NaCl, 1% NP-40, 1% Sodium deoxycholate, 0.1% SDS，絕大多數細胞或動物組織樣品皆可以此配方為基底，依照實驗目的添加離液劑、介面活性劑、還原劑、蛋白酶抑制劑以及磷酸酶抑制劑，或調整其濃度。