聚合脢連鎖反應(Polymerase Chain Reaction | 合法醫療器材資訊網

由於嗜熱細菌生活在溫度達到50至80°C(122至176°F)的間歇泉中，它的DNA聚合酶具有耐熱性。在用於PCR反應時，高溫並不能破壞這種DNA聚合酶，因此不需要 ...

一、成分 1.DNA 模板：雙股螺旋DNA 經高溫解離成單股DNA，作為PCR 反應的模版。以一般反應體積為50uL 而言，只需1~100ng 的DNA 就非常足夠了，太多的DNA 反而會降低反應的專一性。 2.Primer 引子：功能就像衛星導航一樣，能找到目標基因片段的頭、尾兩端。一般反應濃度約為0.2~0.4uM，太高或太低都不恰當，濃度太高時會降低反應的專一性，太低時反應就會失敗。 3.DNA Polymerase 聚合?：能將4 種核酸原料（dNTPs：dATP、dGTP、dCTP、dTTP）依照DNA 模板密碼，正確地一個一個地加上去，而合成新的ㄧ股基因片段。聚合脢的種類繁多，依其特性大致上可區分成一般聚合脢（Taq）、熱啟動（Hot-Start）聚合脢、校正（Proofreading）聚合脢三類。 4.MgCl2 氯化鎂：可提供鎂離子作為聚合?的輔因子，輔助聚合脢作用。一般都使1.5~2.0mM。若濃度太高，雖然可以增加PCR的產量，但是專一性會大幅降低；若濃度太低，則PCR 產量會大幅降低。 5.緩衝液：主要是由Tris、KCl 所調配成的緩衝液，pH 約8.4 資料來源：toxicologyguide[1] 二、步驟 1. Denaturation：利用高溫（90~95℃）將雙股螺旋DNA 解離成單股DNA，再以單股DNA 作為複製的模板。 2. Annealing：溫度降低到適當溫度（不同的primers 其annealing溫度會有不同），讓引子黏結到正確的目標基因位置。（參考圖2的步驟2） 3. Extension：溫度調整到72℃，鎂離子作為酵素輔因子，讓DNA聚合脢依照模板上的密碼，開始將核酸原料（dNTPs）一個接著一個的加上去，合成另一股新DNA 片段。連續地重複30~40 次上面的三個步驟，只需要2 小時，理論上即可以將極微量的DNA 片斷大量複製約230~40倍（約幾十億倍）。資料來源：genedragon[2] 資料來源：紐芬蘭紀念大學[3] 三、為了提升PCR 的效率（efficiency）或專一性（specificity），常需視不同的基因片段而要加入某些添加劑（Additives），例如：DMSO ...

一篇搞懂PCR反應條件的選擇 | 合法醫療器材資訊網

PCR 技術簡介原理 | 合法醫療器材資訊網

基本上，這個技術主要包含三個步驟：DNA 分開(denaturation)、引子煉. 合及引子廷伸作用。 A. DNA 分開：雙股DNA 可利用高溫加熱而將之分開。當然若是溫度 ... Read More

聚合酶連鎖反應 | 合法醫療器材資訊網

步驟[編輯] · 變性：利用高溫（93-98℃）使雙鏈DNA分離。高溫將連接兩條DNA鏈的氫鍵打斷。 · 退火或稱接合,復性：在DNA雙鏈分離後，降低溫度使得引子可以結合 ... Read More

聚合脢連鎖反應(Polymerase Chain Reaction | 合法醫療器材資訊網

由於嗜熱細菌生活在溫度達到50至80 °C (122至176 °F)的間歇泉中，它的DNA聚合酶具有耐熱性。在用於PCR反應時，高溫並不能破壞這種DNA聚合酶，因此不需要 ... Read More

什麼是PCR? 聚合酶鏈鎖反應? | 合法醫療器材資訊網

2017年3月17日 — PCR的主要關鍵步驟包含： 1. DNA變性(Denaturation)，利用高溫使DNA模板變單股； 2. 引子黏合(Annealing)，降低溫度讓引子黏合到模板上； Read More

PCR | 合法醫療器材資訊網

2020年12月17日 — 但是在這個溫度下，DNA聚合酶被破壞，因此在每個循環的加熱步驟後必須補充新的聚合酶。穆利斯的原始PCR反應效率極低，需要大量時間 ... Read More

（十）即時定量聚合酶連鎖反應(Real | 合法醫療器材資訊網

Q-PCR技術利用專一的Primer probe(引子探針)會在PCR(聚合酶連鎖反應)過程中. 產生螢光，再利用 ... 實驗步驟. 1. 配製DNA sample：加入ddH2O將DNA sample濃度稀釋為50ng/5λ。 2. ... Real-Time PCR循環溫度如下：Stag1 50℃反應2分鐘；. Read More

PCR方法实验步骤和常见问题 | 合法醫療器材資訊網

要开始PCR反应，首先需要将DNA模板进行变性来释放出单链的DNA，这通常需要94或98度的高温；之后将温度降低到50-65度让特异性的引物与单链DNA模板形 ... Read More

第八章聚合酶鏈鎖反應(Polymerase chain reaction | 合法醫療器材資訊網

但若是變性步驟的時間太長或溫度太高則會造成不必要的酵素. 活性喪失。而黏合則是令引子(Primers)於一定的溫度下附著於模板DNA 兩端，引子黏. 合所需 ... Read More

細胞核酸純化 | 合法醫療器材資訊網

2018年5月24日 — 延長反應(extension)：將溫度調整到DNA聚合酶作用的有效溫度而合成新的 ... 對PCR而言，將雙股DNA完全分開是相當重要的起始步驟，作用不 ... Read More

相關資訊整理

一篇搞懂PCR反應條件的選擇 | 合法醫療器材資訊網

PCR 技術簡介原理 | 合法醫療器材資訊網

聚合酶連鎖反應 | 合法醫療器材資訊網

聚合脢連鎖反應(Polymerase Chain Reaction | 合法醫療器材資訊網

什麼是PCR? 聚合酶鏈鎖反應? | 合法醫療器材資訊網

PCR | 合法醫療器材資訊網

（十） 即時定量聚合酶連鎖反應(Real | 合法醫療器材資訊網

PCR方法实验步骤和常见问题 | 合法醫療器材資訊網

第八章聚合酶鏈鎖反應(Polymerase chain reaction | 合法醫療器材資訊網

細胞核酸純化 | 合法醫療器材資訊網

（十）即時定量聚合酶連鎖反應(Real | 合法醫療器材資訊網