輕鬆了解四種主要的IHC 間接呈色檢測方式 | 合法醫療器材資訊網

2019年7月8日—免疫組織化學染色(Immunohistochemistry,IHC)中的呈色檢測...最為常用的酵素包括能將DAB(3,3'-Diaminobenzidine)呈色劑轉化為棕色產物 ...

輕鬆了解四種主要的 IHC 間接呈色檢測方式

免疫組織化學染色 (Immunohistochemistry, IHC) 中的呈色檢測方式 (Chromogenic detection) 仰賴於能夠將可溶性呈色劑轉化為不溶性色素沉澱物的酵素。這些酵素通常與二級抗體結合，二級抗體則會與目標蛋白專一性一級抗體結合；另外，也可使用直接帶有酵素標定的一級抗體。最為常用的酵素包括能將 DAB (3,3-Diaminobenzidine) 呈色劑轉化為棕色產物的 HRP (Horseradish peroxidase) 酵素，以及能將 AEC (3-Amino-9-ethylcarbazole) 呈色劑轉化為紅色產物的 AP (Alkaline phosphatase) 酵素。

由於呈色檢測方式具有更好的訊號放大效果，因此一般而言呈色檢測會比螢光檢測更加靈敏。並且，與螢光基團不同，呈色檢測方式所生成的色素沉澱物具有光穩定性，這使得呈色檢測的染色切片能夠穩定保存多年。再者，有別於需要專門光源與濾片的螢光檢測方式，呈色檢測僅需要一般標準顯微鏡即可觀察訊號。但不可否認地，呈色檢測方式所需時間比螢光檢測更長，因其包含了更多的孵育 (Incubation) 與阻斷 (Blocking) 步驟。

如今有四種主要的 IHC 間接呈色檢測方式被廣為使用，包含基於生物素 (Biotin) 的 ABC (Avidin-biotin complex) 與 LSAB (Labeled streptavidin-biotin) 方式，以及基於非生物素的聚合物 (Polymer) 檢測方式，例如微量聚合物與聚合物檢測法。

ABC (Avidin-biotin complex) 檢測法

ABC 檢測法仰賴於標定有生物素的二級抗體、以及標定有酵素的抗生物素蛋白 (Avidin)。抗生物素蛋白具有與生物素結合的特性，且為四價分子，因此能在偵測目標上形成巨大的呈色反應複合物，具有訊號放大的效果。早期的 IHC 實驗間...