How to Design Primers & Probes for PCR & qPCR | 合法醫療器材資訊網
2013年10月21日—GuidelinesfordesigningPCRandqPCRprimersandprobes.Improveyourassays,improveyourresults.
It is important to give careful consideration to the locations and characteristics of primers, probes, and amplicons before starting any PCR or qPCR (quantitative PCR, also known as real-time PCR) experiment. Particularly crucial for primer and probe design is ensuring you have an appropriate melting temperature (Tm), which determines the conditions under which these oligos will bind to your target sequence. This article provides general guidelines for designing primers and probes and choosing target locations for amplification.
When calculating melting temperatures using online tools, such as the IDT SciTools™ OligoAnalyzer™ Tool[1] and PrimerQuest™ Tool[2], be sure to enter the appropriate conditions from your PCR or qPCR experiment. Commonly used parameters are: 50 mM K+, 3 mM Mg2+, and 0.8 mM dNTPs; however, reaction conditions can vary widely from this, particularly with respect...
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