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此染色法通常會搭配Propidineiodide核酸染劑(PI)共同染色,原理在於細胞凋亡初期細胞外翻外會影響膜通透性的改變,正常活細胞不會攝入PI,但死亡的細胞及 ...
細胞凋亡(Apoptosis)偵測技術細胞凋亡(Apoptosis)早期也被稱為Program cell death (PCD),從字面上就可以理解細胞經過一連串固定的程序走向死亡的過程,在生物上如胚胎發育及維持正常機能扮演重要角色;例如人類手指在胚胎期是蹼狀,經過細胞凋亡過程將蹼間細胞組織消失,另外細胞遭到病毒感染啟動防禦機制也會採取細胞凋亡將自身細胞犧牲而不讓病毒增殖。
細胞啟動凋亡程序後,從不同階段可以觀察到細胞型態上的變化,如初期的細胞皺縮、細胞核仁消失等,粒線體釋出cytochrome C接連啟動後續Caspase家族蛋白的訊號傳遞;中期染色體斷裂,細胞體型走向”泡泡化”稱為凋亡小體(apoptotic body),此階段到後期細胞漸漸裂解成多個泡泡體,每個泡體包含了包含了胞器還有裂解的染色體;凋亡後期這些凋亡小體逐漸被周邊組織吸收或被巨噬細胞吞噬。
初步瞭解了細胞凋亡的階段,就可以針對每個階段的特性進行形態上的觀察或是分子層次的偵測。以下分階段介紹現有常見的偵測技術:
初期偵測
Annexin-V是一種分子量為35~36KD的Ca2+依賴性磷脂結合蛋白,能與Phosphatidylserine (PS) 高親和力特異性結合。將Annexin-V進行螢光素(FITC、PE)或生物素(biotin)標定,以標定的Annexin-V作為螢光探針,利用流式細胞儀或螢光顯微鏡可檢測細胞凋亡的發生。
為何可以這樣做的原因是,細胞凋亡早期細胞膜有外翻的現象,而PS在正常細胞是位於細胞膜的內側,當外翻現象發生時PS就會曝露在細胞膜外側,利用Annexin-V及PS的專一結合的特性偵測細胞是否處於細胞凋亡初期階段,故PS的外翻被視為初期的指標之一。
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