免疫組織化學染色相關問題 | 合法醫療器材資訊網

5、DAB孵育時間過長或濃度過高。6、PBS沖洗不充分，殘留抗體結果增強著色，在一抗/二抗/SP孵育後的浸洗尤為重要。7、標本染色過程中經常出現乾片 ...

免疫組織化學染色(Immunohistochemistry, IHC)染色問題

→客戶對於結果的常見問題[2][1]

一、 產生組織切片非特異性染色的原因有哪些？ 如何解決？

1 、 抗體孵育時間過長、抗體濃度高易增加背景著色。 這可通過縮短一抗/二抗孵育時間、稀釋抗體來控制。 這是最重要的一條。

2 、 一抗用多株抗體易出現非特異性著色，建議試用單株抗體看看。

3 、內源性過氧化物酶和生物素在肝臟、腎臟等組織含量很高（含紅血球較多的組織），需要通過延長滅活時間和增加滅活劑濃度來降低背景染色。

4 、非特異性組分與抗體結合，這需要通過延長二抗來源的動物免疫血清封閉時間和適當增加濃度來加強封閉效果。

5 、 DAB 孵育時間過長或濃度過高。

6 、 PBS 沖洗不充分，殘留抗體結果增強著色，在一抗 / 二抗 /SP 孵育後的浸洗尤為重要。

7 、 標本染色過程中經常出現乾片，這容易增強非特異性著色。

二、免疫組織化學染色呈陰性結果的原因有哪些？

1 、抗體濃度和品質問題以及抗體來源選擇錯誤。 不是抗體濃度越高就越易出現陽性結果，抗原抗體反應有前帶和後帶效應，必須測試最佳濃度。

2 、抗原修復不全，對於甲醛固定的組織必須用充分抗原修復來打開抗原表位，以利於與抗體結合；建議微波修復 用高火 4 次 *6min 試試。 有人做過實驗，這是最佳的時間和次數。 若不行，還可高壓修復，或是電鍋修復(陽春實用的方法)。

3 、組織切片本身這種抗原含量低。

4 、血清封閉時間過長。

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