核酸萃取之磁珠純化 | 合法醫療器材資訊網

2017年11月10日—在過去的核酸萃取需要一連串繁瑣的過程，常用的萃取方式有兩大類[1]，(1)有機溶劑萃取純化法：以Phenol-Chloroform將細胞溶解(lysis)， ...

     在過去的核酸萃取需要一連串繁瑣的過程，常用的萃取方式有兩大類[1]，(1)有機溶劑萃取純化法：以Phenol-Chloroform將細胞溶解(lysis)，再經過超高速離心使溶液分層，此時DNA會在水相層與其他成分(如蛋白質等)分開，最後再利用酒精或異丙醇讓DNA沉澱，得到純化的DNA；(2)非有機溶劑萃取法；(3)管柱萃取純化法(column purification)，其主要以陰離子界面活性劑將細胞打破後，透過酵素、抑制劑及鹽類等，達到去除雜質、使DNA鹽析並純化出DNA。傳統DNA的純化耗時、無法萃取完全、產量低以及萃取過程中的有機溶劑具有腐蝕毒性等，諸多問題需要被解決[2]。

     隨著科技的日新月異，發展出許多高分子材料，而其中更衍伸出磁分離(Magnetic separation)的純化概念，結合分生、物理及化學的理論，透過結合磁性奈米粒的表面配體(ligand)不同，進行親和性的反應，可用於不同物質的純化，例如：蛋白質、DNA、抗體等[3]。在核酸領域，舉凡poly-A mRNA、DNA純化及次世代NGS都有此技術參與[3]。這樣的純化方式泛稱固相-液相可逆化固定的分離純化技術(Solid Phase Reversible Immobilisation, SPRI)，比起以往的單純矽粒子具有更好的分離效率。

    磁珠的發明構想最初來自於挪威科技大學的化學家John Ugelstad，他在1976年以聚苯乙烯(Polystyrene)為主要材料，製造出均勻磁化的球體粒子(稱為Dynabeads®)[3]。另外，在1979年Vogelstein與Gillespie發現玻璃粉末上的矽能在碘化鈉的存在下能與核酸產生鍵結，之後許多科學家陸續利用此方法應用在不同的核酸萃取，例如：萃取質體DNA、噬菌體核酸等，而此方法針對不同的核酸類型，可透過lysis buffer與binding buffer中的離子強度與pH值來調控吸附核酸的強弱(圖一) ...