革蘭氏染色法Gram staining | 合法醫療器材資訊網

1.將塗抹覆以結晶紫，靜置一分鐘。·2.以蒸餾水輕洗。·3.覆以革蘭氏碘液媒染劑，靜置一分鐘。·4.以蒸餾水清洗。·5.以95%乙醇脫色，勿脫色過度，逐滴滴下，​至 ...

此種染色法由丹麥微生物學家Hans Christian Gram 於西元1884 年所創， 是最常用的細菌鑑別染色法。步驟如下：

1.初染劑（Primary Stain）：初染劑乃結晶紫（crystal violet），使細菌染成紫藍色。

2.媒染劑（Mordant）：乃革蘭氏碘液（Grams Iodine），可與初染劑結合而形成不溶性複合物。所形成之結晶 紫-碘（CV-I）複合體藉以加強染料顏色，此時所有細菌均成紫黑色。

3.脫色劑（Decoloring agent）：乃95%乙醇，此試劑具有脂溶性（lipid solvent） 與蛋白質脫水劑之雙重功能。其作用依微生物細胞壁所含脂肪濃度而定。[[格蘭氏 陽性菌]]之脂質含量低且細胞壁具有厚層之肽聚醣，乃保留CV-I 複合體之主要因素，因少量之脂質經乙醇作用，立刻溶解，形成細胞壁之細孔，但此細孔隨即因乙醇之脫水作用而封閉，以致緊密結合之初染劑不易移去，終於保留紫色。[[革蘭氏陰性菌]]細胞壁中之外層含高量之脂質，易為乙醇溶解，形成大孔。即使引起細胞壁蛋白之脫水也不易封閉該孔，因此有利於未結合CV-I 複合體之釋出，致使菌體成無色。

4.複染劑（Counterstain）：最後試劑為番紅（Safranin），凡經上述脫色之細菌，被此染料染成紅色。因僅革蘭氏陰性菌發生脫色，故於此步驟能吸收複染劑。革蘭氏陽性菌則保留初染時之紫色。

革蘭氏碘液就是2% iodine ＋ 3% potassium iodide 溶於 70% ethanol。

革蘭氏陽性菌與革蘭氏陰性菌的比較