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在所述缓冲溶液中可以成功地转染不同的细胞类型,特别是具有低活性的静止与...作为有利因素,本发明的缓冲溶液含有HEPES和/或Na2HPO4/NaH2PO4作为 ...
电穿孔用缓冲溶液及上述溶液的使用方法本发明涉及一种悬浮动物细胞或人的细胞和溶解生物活性分子的缓冲液,以便使用电流将所述生物活性分子引入细胞中和使用电流将生物活性分子引入动物细胞或人的细胞中的方法,包括缓冲溶液的使用。
发明背景
将生物活性分子,例如DNA,RNA或蛋白质引入活细胞中是研究这些分子的生物功能的重要手段。将外来分子引入细胞的优选方法是电穿孔法,这种方法与其它方法不同,它通过转移试剂只对靶细胞的生物结构产生轻微的永久变化。电穿孔过程中,通过短暂电流将外来分子从水溶液引入细胞中,其中,在短暂电脉冲作用下可以使细胞膜被外来分子渗透。由于细胞膜中形成了短暂的“小孔”,如果需要的话,最初进入细胞质的生物活性分子已经能在细胞质中产生有待研究的作用。然而在将DNA引入真核细胞的情况中,DNA必须进入细胞核,这样才能表达遗传信息。在分裂细胞的情况中,这可能在细胞分裂期间发生,其中,核膜暂时溶解后,DNA被动地进入细胞核。然而在研究静态或弱分裂细胞例如原代动物细胞时,DNA不会以这种方式进入细胞核,因此这里不能使用相应的方法或者至少使用相应的方法是十分费力的。而且,特别是在将DNA引入动物细胞中时,所谓的转染,由于细胞的不稳定性,经常会发生特殊的问题,这是由于细胞的存活率是影响转染效率的一个重要参数。
现有技术水平
在过去,经常使用细胞培养基(Anderson等,J.Biochem.Biophys.Meth.22,207)或使用磷酸盐缓冲的盐溶液或HEPES(Potter等(1984),Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81,7161;Fromm等(1985),Nature 319,791)来摄取动物细胞和DNA分子。然而,动物细胞电穿孔期间(Shimizu等(1986),Med.Immunol.11,105;Riggs等(1986),Proc.Natl.Acad.Sci.USA 83,5602),也使用非缓冲或弱缓冲的甘露糖醇或蔗糖溶液。这种非缓冲或弱缓冲溶液的缺点在于,使用这些溶液会增加细胞死亡率并大大降低转染效率(Yan等(1998),Bio Techn...
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