[求救] medaka冷凍切片及HE染色(已爬文過)(急) | 合法醫療器材資訊網
![[求救] medaka冷凍切片及HE染色(已爬文過)(急)](https://i.imgur.com/6y29Lx7.jpg)
各位大大好現在我在做medaka的冷凍切片及HE染色(之後要繼續做免疫...有沒有建議的切片前處理和HE染色的步驟，或是其他染色的步驟在下方 ...
作者dearetet (忙碌者~)
看板Biotech
標題[求救] medaka冷凍切片 及 HE染色(已爬文過)(急)
時間Mon Jul 29 19:24:21 2013
各位大大好 現在我在做 medaka 的冷凍切片 及 HE染色 (之後要繼續做 免疫染色、骨骼染色及細胞凋亡的染色) 但是卡在，切片一直都切不好，切片前處理條件一直試不出好的結果 (組織都會破損)(主要觀察腦和眼睛) 版上的方法有參考(畢竟sample不是medaka)網路的資料也參考過，但切出來就是都不好 以及HE染色，染色前和染色後，組織會有破損的情況， 有時切片甚至在染的時候切片會掉下來(只有一部分) 所以在此想問問各位大大，有沒有建議的切片前處理和HE染色的步驟，或是其他染色的步 驟 在下方我會列出我切片的處理方式和HE染色的步驟， 不知是否可以修正的地方 (本來想附上照片，但照片很多，有需要看照片的，可以提出，謝謝!) 先感謝大大! 一、切片前處理 1. 4% (paraformaldehyde)PFA + 30% sucrose，RT，8H，用Rocking shaker 30 rpm 用OCT包埋，直接放入 -80 ℃冰箱小於30分鐘後切片。 厚度10 um，溫度-15 ℃。 2. 4% PFA + 1X PBS + 5% sucrose + 33%OCT ， 4度C，1H → 4% PFA + 1X PBS + 10% sucrose + 33%OCT ， 4度C，1H → 4% PFA + 1X PBS + 30% sucrose + 33%OCT ， 4度C，O.N 用OCT包埋，直接放入 -80 ℃冰箱，2H後切片。 厚度10 um，溫度-15 ℃。 3. 5% sucrose ， 4度C，1H → 10% sucrose ， 4度C，1H → 20% sucrose ， 4度C，1H → 30% sucrose ， 4度C，1H 用試鏡紙將水分吸乾 用保鮮膜包住sample 放入 - 20度C 2H 放入 - 80度C 4H 將鋁座用OCT做一個平台，OCT變白後，再加入一點...冷凍組織細胞免疫螢光染色步驟材料 | 合法醫療器材資訊網
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