Western-blotting | 合法醫療器材資訊網

2020年1月8日—製造抗體所使用的抗原通常為某一物種的重組蛋白或是合成胜肽鏈，經由...您可以參考ACEBbiolabs所整理的西方點墨法常見問題(WesternBlot) ...

Western-blotting | 如何選擇抗體?

為了獲得理想的 Western-blotting 實驗結果，抗體的選擇非常關鍵。

同一個目標蛋白，市面上各廠牌各自擁有不同的抗體，面對玲瑯滿目的抗體，要如何篩選，才能選中滿意的抗體?

首先，請先確認抗體的基本資訊是否符合您的實驗需求

Application

抗體可以應用的實驗包括 WB、ELISA、IHC、IF、IP、FCM等，抗體說明書上列出該支抗體能應用的實驗。多數抗體能辨認變性蛋白，亦有設計專門辨認非變性蛋白或是蛋白表面的抗體。而 WB 實驗為凝膠電泳後轉印至膜上的變性蛋白，所以務必挑選Application 寫上 WB 的抗體。

Reactivity

製造抗體所使用的抗原通常為某一物種的重組蛋白或是合成胜肽鏈，經由實驗測試或是序列比對可以分析該抗體能辨認來其他物種的同源蛋白。例如：人類(Human)、大鼠(Rat)、小鼠(mouse) 的氨基酸序列具有高度相似性，使用人類目標蛋白為抗原所產生的抗體便有很高的機率能辨認大鼠及小鼠的同源蛋白。若是您的目標蛋白來源物種未列出，亦可經由序列比對推測該抗體能否辨認您的目標蛋白。

Host species

選擇抗體的來源物種時，最好避免與您的樣品為相同物種。如此可避免二級抗體辨認一級抗體時辨認到您的樣品中原有抗體。例如：您的蛋白樣品為小鼠組織萃取物，則建議挑選來源物種為兔子的抗體。若無法避免，二抗辨認到樣品內源性的IgG，將在WB上的 50 kDa 及25 kDa位置呈現條帶訊號。不過，如果您的蛋白樣品並不含有內源性IgG，例如：培養細胞萃取物，抗體來源物種的挑選則不太影響WB結果。

在實驗設計上，也可利用挑...