Western blotting | 合法醫療器材資訊網
WesternBlot從蛋白萃取、蛋白定量、蛋白質電泳、轉漬、Blocking、抗體選用到最終ECL的選擇,每個步驟環節繁瑣,因此影響實驗結果的變...ProteinBand不一致.1.凝膠不均勻:增加凝膠時間,或是確認APS是否fresh,APS會影響凝膠速率。
Western blotting | 西方點墨法常見問題
西方點墨法 (Western Blot) 為實驗室中最常使用於分析蛋白質的實驗,利用抗體與蛋白質專一性的特質,來偵測特定蛋白質的表現情況。
Western Blot 從蛋白萃取、蛋白定量、蛋白質電泳、轉漬、Blocking、抗體選用到最終ECL的選擇,每個步驟環節繁瑣,因此影響實驗結果的變因也相對的多。
ACE Biolabs以自身代工服務多年的經驗,整理出Western Blot常見的問題以及處理方式,幫助客戶解決實驗上的困擾,並且也提供Western Blot代工服務,幫您呈現完美的實驗結果。
Q1. Protein Band 不一致
1. 凝膠不均勻 : 增加凝膠時間,或是確認APS是否fresh,APS會影響凝膠速率。(ACE Biolabs C3009[1])
2. 樣品中鹽類濃度不一 : 將樣品純化去鹽,加入相同的buffer。
3. 上樣體積不一致 : 加樣前,使用RIPA or ddH2O 將樣品體積配置成相同。
4. 電泳時溫度過高 : 降低電流或是電壓,
Q2. 目標蛋白訊號弱
1. 樣品上樣不足 or 目標蛋白表現低 : 加大樣品上樣量,濃縮樣品蛋白。
2. 轉漬效率低 : 依目標蛋白大小,選擇適合的轉漬電流、時間。
3. 抗體效率不佳 : 增加抗體濃度或增加培育時間。
4. ECL失效 : 注意A、B劑不可混用,造成失效。
5. ECL作用時間不足 : 延長ECL時間作用,或是蛋白訊號較微弱,改選擇靈敏度更高的ECL。(A1041 ACE...
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