如何优雅快速地完成Western Blot | 合法醫療器材資訊網

这段时间在私信区和评论区收到希望看到有关westernblot方面文章的信息。...蛋白定量；3、电泳；4、转印；5、封闭；6、孵育一抗；7、孵育二抗；8、曝光。

这段时间在私信区和评论区收到希望看到有关western blot方面文章的信息。说老实话，该话题的文章已有很多，不少试剂公司也推出了相关手册、指南，因此本司机无意再重复一遍。不过有些私藏货还是可以拿出来分享的。

想起以前读书的时候，觉得做western blot简直就是一件麻烦的事，准备功夫一大堆，配制试剂和洗洗涮涮的时间几乎占了一半。万一遇到个坑爹抗体，时间精力就全白费了。近几年在新的单位工作，由于配套和管理更加完善，加上摸出了些门道，渐渐觉得western blot也没那么讨厌了，甚至做起来还挺舒服。按照本文的方案，从收蛋白开始，到最后曝光出条带，完全可以在朝九晚五的一天时间内搞定。下面就让我们一起来看看这个方案的设计思路。

首先我们把整个western blot实验流程过一遍：1、收蛋白；2、蛋白定量；3、电泳；4、转印；5、封闭；6、孵育一抗；7、孵育二抗；8、曝光。

1、收蛋白：

这个环节，其实并没有多少优化的空间。裂解/匀浆、离心这两个步骤必不可少，因此我们不需要在这上面花心思。

2、蛋白定量：

为了节省时间，我们可以在收蛋白的离心步骤，开始配制蛋白定量试剂。一般常用BCA法和Bradford法。BCA法反应时间长，大概需要30 min，但线性范围宽。Bradford法只需反应5 min即可测定，但线性范围窄。如果预计样品组之间的蛋白浓度差异较小，可以选用Bradford，否则最好选用BCA较为妥当。（当然，如果样品中存在去污剂、还原剂或高浓度脂类等杂质，就要根据需求选取相应的测定方法。）

3、电泳...